標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱：熒光分光度計(jì)檢定用硫酸奎寧溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

生產(chǎn)廠家：四川中測(cè)標(biāo)物科技有限公司

相對(duì)擴(kuò)展不確定度：2%，k=2

量值 空白，1.00×10-9 g/mL（Urel=3%），1.00×10-7 g/mL，4.00×10-7 g/mL，8.00×10-7 g/mL，1.00×10-6 g/mL

包裝規(guī)格：20 mL

有效期限：12個(gè)月

適用范圍：JJG 537-2006 熒光分光光度計(jì)

保存條件：低溫（2 ℃~8 ℃），避光保存

熒光分析法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、試樣量少的特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是通過(guò)學(xué)習(xí)熒光法測(cè)定硫酸奎寧，掌握VARIAN熒光分光光度計(jì) 的使用方法以及利用熒光法進(jìn)行定量分析。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.熟悉VARIAN熒光分光光度計(jì)的原理和使用

2.掌握激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的概念及測(cè)定方法

3.掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行熒光定量分析

VARIAN熒光分光光度儀

熒光分光光度計(jì)基本流程如圖：

光譜掃描的實(shí)現(xiàn):

儀器有兩套光柵分光系統(tǒng)，根據(jù)激發(fā)和發(fā)射光柵動(dòng)的形式可形成兩種光譜：

激發(fā)光譜：激發(fā)光柵轉(zhuǎn)動(dòng)

發(fā)射光譜：發(fā)射光柵轉(zhuǎn)動(dòng)

熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜

固定發(fā)射光波長(zhǎng).以不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光物質(zhì),化合物發(fā)射的熒光強(qiáng)度F與入射光波長(zhǎng)的關(guān)系曲線λ

2.發(fā)射光譜 (或熒光光譜 )

固定激發(fā)光波長(zhǎng). 化合物發(fā)射的熒光中各種波長(zhǎng)組分的熒光強(qiáng)度.

二、實(shí)驗(yàn)原理

1.硫酸奎寧的分子 結(jié)構(gòu)特征

硫酸奎寧屬生物堿類抗心率失常藥,其分子具有喹啉環(huán)結(jié)構(gòu),可產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,可直接用熒光法測(cè)定其熒光強(qiáng)度,由校正曲線求出回歸方程進(jìn)而求出試樣中奎寧的濃度.

2.定量依據(jù)與方法

(1)定量依據(jù)：

在低濃度時(shí),溶液的熒光強(qiáng)度與溶液中熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系

If = Kc

(2)定量方法:校正曲線法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法：

配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測(cè)定熒光強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測(cè)量未知試樣的熒光強(qiáng)度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度;

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

•1.儀器和試劑:

儀器:熒光分光光度計(jì),刻度吸管,容量瓶

試劑:0.1μg/ml硫酸奎寧(儀器室),

100μg/ml硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液,

硫酸奎寧待測(cè)液

0.05mol/l稀硫酸溶液

•2.實(shí)驗(yàn)步驟:

1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:

精密吸取硫酸奎寧標(biāo)液(100μg/ml,0.05 mol/L硫酸溶解)1.0、2.0、3.0、4.0及5.0ml分別置于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,制得對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液,并計(jì)算濃度.

2.待測(cè)試樣溶液的制備:

吸取硫酸奎寧待測(cè)液1.0ml,于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,得待測(cè)試樣溶液.

3.測(cè)定:

(1)用0.1ug/ml的硫酸奎寧測(cè)定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜:

開(kāi)機(jī)—打開(kāi)光譜掃描工作站--方法建立—調(diào)零--激發(fā)光譜的測(cè)定—發(fā)射光譜的測(cè)定—打印結(jié)果

(2)校正曲線法測(cè)定試樣溶液的濃度:

打開(kāi)濃度測(cè)定工作站--方法建立--校正曲線的測(cè)定--試樣溶液的測(cè)定—打印結(jié)果--關(guān)機(jī)

注意事項(xiàng)：溶液配制過(guò)程中需應(yīng)當(dāng)規(guī)范操作各種容量?jī)x器，防止誤差；樣品測(cè)定時(shí)，應(yīng)該按照從低濃度到濃度的順序，盡可能的減少測(cè)量誤差；儀器校正后制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的參數(shù)應(yīng)該和測(cè)定樣品時(shí)保持一致。