BQ6001 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶試劑盒 其他系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BQ6001
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/5/4 10:21:11
- 訪問次數(shù) 16
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BQ6001 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶試劑盒 |
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK)試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
PEPCK（EC 4.1.1.32）廣泛存在于動物、植物、微生物和細(xì)胞中，催化草酰乙酸轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇式丙酮酸，是調(diào)節(jié)糖異生途徑的關(guān)鍵酶。
測定原理：
PEPCK 催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化 NADH氧化生成NAD+，在 340nm 下測定NADH 下降速率，即可反映 PEPCK 活性。
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶試劑盒 其他系列
組成：
產(chǎn)品名稱 | BQ6001-50T/48S | Storage |
提取液：酸性提取液 | 60ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 45ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 41μl | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 支 | -20℃ |
試劑四：粉劑 | 1 支 | -20℃ |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 μl 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（μl）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1μl 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(μl)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1μl 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑四的配制：臨用前加入 2.5μl 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、將工作液和試劑四置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 5 分鐘。
5、在 1μl 石英比色皿中加入 50μl 樣本、50μl 試劑四和 900μl 工作液，立即混勻，記錄 340nm 處初始吸光值A1 和 1min 后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若ΔA 大于 0.1，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測定，使ΔA 小于 0.1 可提高檢測靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
PEPCK 活性計(jì)算：
1、血清（漿）PEPCK 活力計(jì)算
單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/μl））＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=3215×ΔA 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 PEPCK 活力計(jì)算
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=3215×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位定義：每 1 萬個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PEPCK（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=6.43×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.05 μl；V 樣總：加入提取液體積，1 μl；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/μl；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
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