BR6011 ?；D(zhuǎn)移酶活性測定試劑盒 脂肪酸系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BR6011
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/5/4 13:43:48
- 訪問次數(shù) 17
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 25T/24S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BR6011 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去?；磻?yīng) |
?；D(zhuǎn)移酶（alcohol acyl transferase，AAT）活性測定試劑盒說明書
分光光度法
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
AAT 是一個(gè)多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去?；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號傳導(dǎo)中具有重要作用。
測定原理：
AAT 催化乙酰CoA 轉(zhuǎn)移乙?；蕉〈迹尫诺?/span> CoA 還原DTNB 生成TNB；TNB 在 412nm 有吸收峰，測定 412 nm 吸光度增加速率可計(jì)算 AAT 活性。
?；D(zhuǎn)移酶活性測定試劑盒 脂肪酸系列
組成：
產(chǎn)品名稱 | BR6011-25T/24S | BR6011-50T/48S | Storage | |
提取液：液體 | 25ml | 50ml | 4℃ | |
試劑一：液體 | 25ml | 50ml | 4℃ | |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 1 瓶 | -20℃ | |
試劑三：粉劑 | 1 支 | 1 瓶 | 4℃避光 | |
說明書 | 一份 | |||
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 8000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
FA005-25T/24S-AAT 測定操作：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入 22.5mL 試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇 1.25mL 充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存。
4、 空白管：在Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 提取液和 900μL 工作液，充分混勻，35℃反應(yīng) 15min，加入
50μL 試劑三，充分混勻，25℃靜置 10min，測定 412nm 處吸光值，記為 A 空白管。
5、 測定管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 樣本和 900μL 工作液，充分混勻，35℃反應(yīng) 15min，加入 50μL
試劑三，充分混勻，25℃靜置 10min，測定 412nm 處吸光值，記為A 測定管?！?/span>A=A 測定管- A 空白管，空白管只要做一管。
FA005-50T/48S-AAT 測定操作：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入 45ml 試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇 2.5ml 充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存。
4、 空白管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 提取液和 900μl 工作液，充分混勻，35℃反應(yīng) 15min，加入 50μl
試劑三，充分混勻，25℃靜置 10min，測定 412nm 處吸光值，記為A 空白管。
5、 測定管：在Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 樣本和 900μl 工作液，充分混勻，35℃反應(yīng) 15min，加入 50μl
試劑三，充分混勻，25℃靜置 10min，測定 412nm 處吸光值，記為A 測定管?！?/span>A=A 測定管- A 空白管，空白管只要做一管。
AAT 活性計(jì)算公式：
（1） 按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（e×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（e×d）×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總) ÷T = 98.04×△A÷W
（3） 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（e×d）×V 反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總) ÷T
= 98.04×△A÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4） 按液體體積計(jì)算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol TNB 定義為一個(gè)酶活單位。
AAT (nmol/min /ml) = △A ÷（e×d）×V 反總÷V 樣÷T =98.04×△A
e：TNB 消光系數(shù)，13600L/mol/cm；V 反總：反應(yīng)總體積，1ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.05ml；
V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白含量，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，15 min。
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