用于 qPCR 的不含 ROX 的 GreenMasterMix FAST

規(guī)格：
該實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 預(yù)混液為即用型 2 時(shí)間預(yù)混液，不含 ROX™
，適用于使用 MIC Cycler 進(jìn)行 FAST PCR

初始變性時(shí)間
短，針對(duì) 2 步法 qPCR
優(yōu)化，等分試樣大?。? mL。

PCR 引物延伸 多重 PCR 低拷貝靶標(biāo) PCR 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR

One unit is defined as the amount of enzyme which will convert 10 nmoles of dNTPs to an acid-insoluble form in 30 min at 72°C under the assay conditions (25 mM TAPS (tris-(hydroxymethyl)-methyl-amino-propanesulfonic acid, sodium salt) pH 9.3 (25°C); 50 mM KCl; 2 mM MgCl2; 1 mM b-mercaptoethanol; and activated calf thymus DNA as substrate.

Sicherheits Hinweise / Safety

Klassifizierungen / Classification

eclass-Nr: 32-16-05-02

技巧

快速 PCR：

在進(jìn)行快速實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 時(shí)，考慮引物設(shè)計(jì)和靶標(biāo)大小非常重要。為了在快速循環(huán)條件下進(jìn)行高效擴(kuò)增，建議靶標(biāo)大小在 70 bp 至 200 bp 之間。目標(biāo)長(zhǎng)度越短，總運(yùn)行時(shí)間越快。對(duì)于其他靶標(biāo)和其他引物組，必須通過實(shí)驗(yàn)確定退火步驟。

請(qǐng)使用以下方案作為靈感，因?yàn)槟枰鶕?jù)您的目標(biāo)大小和應(yīng)用的儀器優(yōu)化儀器設(shè)置。

在 LightCycler® 96 上使用 Genaxxon 預(yù)混液（不含 ROX）快速獲得實(shí)時(shí) PCR 結(jié)果

使用 LighCycler96 （Roche） 使用快速循環(huán)實(shí)時(shí) 2 步方案對(duì)不含 ROX 的 GreenMasterMix （2X） 或不含 ROX 的 ProbeMasterMix （2X） 進(jìn)行了測(cè)試;分別為快速 PAH12 Green LC 和快速 Pthr 探針 LC。
qPCR 設(shè)置：使用 GreenMasterMix （2X）（不含 ROX）或 ProbeMasterMix （2X）（不含 ROX），靶向 PAH12 （203 bp） 或 Pthr （75 bp） 的引物和 4 種濃度的 gDNA（40 ng、20 ng、10 ng 和 5 ng）。所有 DNA 濃度均以四次重復(fù)測(cè)試。見圖 1 和圖 2。PCR 反應(yīng)混合物在 LightCycler® 96 上運(yùn)行（對(duì) ROX 無要求）。所應(yīng)用快速方案的儀器設(shè)置、運(yùn)行時(shí)間和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);將 Fast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr 探針 LC 與標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行比較;標(biāo)準(zhǔn) Pthr LC。見表 1.結(jié)果

：標(biāo)準(zhǔn) Fast Pthr 探針 LC 方案的運(yùn)行時(shí)間為 80.8 分鐘?？焖?PAH12 綠色液相色譜和快速 Pthr 探針液相色譜方案的運(yùn)行時(shí)間分別為 47.5 和 40.8 分鐘。所有協(xié)議時(shí)間均包括 samping 時(shí)間和 15 分鐘熱啟動(dòng)。如表 1 所示，F(xiàn)ast PAH12 Green LC 和 Fast Pthr Probe LC 方案的確定標(biāo)準(zhǔn)令人滿意。此外，使用不含 ROX 的 Green 2x 預(yù)混液和快速 PAH12 Green 液相色譜方案進(jìn)行的熔解曲線分析證實(shí)了高特異性。

在 -20°C 下儲(chǔ)存。 僅供實(shí)驗(yàn)室使用！

上海牧榮生物科技有限公司 是一家專注于分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細(xì)胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域，以銷售為主的生物技術(shù)公司。銷售的產(chǎn)品涉及，細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備等?？蛻舯椴即髮W(xué)、研究所、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫、商品檢驗(yàn)檢疫、制藥公司、生物技術(shù)公司和食品工業(yè)等單位。

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