Fluo-5N AM，Cell Permeant 鈣離子熒光探針
- 公司名稱 西安強(qiáng)化生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/5/30 15:19:24
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| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
|---|
【技術(shù)參數(shù)】
分子式：C50H47F2N3O25
分子量：1127.92
解離常數(shù)：~90µM
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
化學(xué)結(jié)構(gòu)式：
【試劑描述】
Fluo-5N AM，Cell Permeant 鈣離子熒光探針是Fluo-4的結(jié)構(gòu)類似物，具有較低的鈣結(jié)合親和力，可用于鈣水平在1µM~1mM區(qū)間內(nèi)的胞內(nèi)鈣離子檢測，而Fluo-3和Fluo-4在這個(gè)區(qū)間內(nèi)的鈣離子反應(yīng)達(dá)到飽和。
Fluo-5N AM，Cell Permeant 鈣離子熒光探針激發(fā)和發(fā)射波長分別是494和516nm。
【使用方法】
A， 試劑準(zhǔn)備
1） 配制Pluronic F-127母液：稱取100mgPluronic F-127粉末中加入500μl DMSO，配制成20% DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。
溶液室溫保存，不用冷藏。如有結(jié)晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。
2）HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2)或者其他生理緩沖液 。
B， 操作步驟
1） 用無水DMSO溶解Fluo-5NAM配制成2-5mM的儲(chǔ)存液，或?qū)⒁雅浜玫腇luo-5NAM儲(chǔ)存液取出于室溫回溫。
（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fluo-5NA M中加入11µl無水DMSO）。
準(zhǔn)備Fluo-5NAM工作液之前，有時(shí)需要往Fluo-5NAM儲(chǔ)存液中加入20% Pluronic F-127溶液，增強(qiáng)AM探針的水溶性。
2） 用HHBS或其他生理緩沖液（含鈣鎂）將Fluo-5NAM+DMSO儲(chǔ)存液稀釋到1-20µM的工作液。
3） 如果細(xì)胞內(nèi)含有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體，磺吡酮（Sulfinpyrazone）可能需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，以降低去酯化探針的泄露水平。
4） 將準(zhǔn)備好的Fluo-5NAM染色工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。室溫或37℃孵育20-120min。
5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理緩沖液清洗細(xì)胞1~2次，以去除殘留探針。
6） 室溫再孵育30min以保證細(xì)胞內(nèi)AM的去酯化。
7） 可用激發(fā)/發(fā)射波長來檢測熒光。
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