【摘要】：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2（TGF-β2）是一種細(xì)胞外糖基化蛋白，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）超家族成員。它通過(guò)I型和II型受體（TGFβR1和TGFβR2）介導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)，在細(xì)胞遷移、增殖、分化、胚胎發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)及組織修復(fù)等生理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。TGF-β2的信號(hào)傳導(dǎo)主要通過(guò)下游SMAD蛋白的磷酸化實(shí)現(xiàn)，調(diào)控目標(biāo)基因表達(dá)。其生物學(xué)功能廣泛，包括抑制免疫細(xì)胞過(guò)度活化、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成、參與胚胎發(fā)育中的器官形成和組織模式化，以及在傷口愈合中調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和新生血管形成。

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牛轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒組成

操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

技術(shù)小提示：

1）加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，避免產(chǎn)生氣泡。加樣時(shí)間宜控制再10分鐘內(nèi)。

2）可用洗板機(jī)洗板，每一步洗滌充分都是實(shí)驗(yàn)的根本。

3）根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng)孵育時(shí)間，但不可超過(guò)30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度的時(shí)候即可終止。

4）終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。

5）實(shí)驗(yàn)完畢后將未使用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至保質(zhì)期。

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