北京迪科馬科技有限公司（迪馬科技）
乳鐵蛋白測(cè)定新標(biāo)準(zhǔn)出爐！迪馬科技GB 5009.299-2024 最新解決方案發(fā)布
檢測(cè)樣品：牛奶
檢測(cè)項(xiàng)目：乳鐵蛋白
方案概述：迪馬科技參考《GB5009.299-2024食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中乳鐵蛋白的測(cè)定》，使用磷酸鹽緩沖液提取試樣中的牛乳鐵蛋白，肝素免疫親和柱ProElutHPIAC富集凈化，反相高效液相色譜柱Bio-BondC4300Å色譜柱分離檢測(cè)，回收率在85%-100%之間。
乳鐵蛋白因具有抗菌，抗氧化，抗癌，促進(jìn)腸道發(fā)育，促進(jìn)鐵吸收，以及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等功能，故在乳制品及相關(guān)食品生產(chǎn)中均有不同程度的添加。2024年2月8日，國(guó)家衛(wèi)生健康委、市場(chǎng)監(jiān)管總局聯(lián)合印發(fā)2024年第1號(hào)公告，發(fā)布47項(xiàng)新食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和6項(xiàng)修改單。其中包含《GB 5009.299-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測(cè)定》。
迪馬科技參考《GB 5009.299-2024 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測(cè)定》，使用磷酸鹽緩沖液提取試樣中的牛乳鐵蛋白，肝素免疫親和柱ProElut® HP IAC富集凈化，反相高效液相色譜柱Bio-Bond® C4 300Å色譜柱分離檢測(cè)，回收率在85%-100%之間。
本方案適用食品中牛乳鐵蛋白的測(cè)定。
(1)磷酸鹽緩沖液Ⅰ：稱取 30.08g十二水合磷酸氫二鈉，2.50g二水合磷酸二氫鈉，加入800mL去離子水溶解，再加入20mL乳鐵蛋白提取劑*，用純水定容至1L，混勻。
(2) 磷酸鹽緩沖液Ⅱ：稱取15.04g十二水合磷酸氫二鈉，1.25g二水合磷酸二氫鈉，5.84g氯化鈉，加適量水溶解，定容至1L，混勻。
(3) 洗脫溶液：稱取7.1g十二水合磷酸氫二鈉，58.4g氯化鈉，用適量水溶解，并定容至1L。
*乳鐵蛋白提取劑隨貨(肝素免疫親和柱ProElut® HP IAC)附贈(zèng)，可有效增加提取效率和凈化效率。
稱取5g樣品到50mL離心管中，加入25mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ，漩渦振蕩5min，然后在4℃，10000r/min條件下離心15min，去除上層奶脂用大量程移液器取出中間層10mL作為上樣液待凈化。
ProElut® HP IAC 6mL 20/pk (Cat.#: 67117)
(1)活化：將10mL注射器連接于親和柱上端，放掉柱管保護(hù)液，取5mL磷酸鹽緩沖液Ⅱ活化親和柱；
(2)上樣：取提取樣液10mL過(guò)柱凈化(控制流速1-3mL/min)，棄去流出液；
(3)淋洗：溶液全部過(guò)柱后，加入10mL磷酸鹽緩沖溶液Ⅱ淋洗，甩干柱內(nèi)水分；
(4)洗脫：加入4mL洗脫溶液進(jìn)行洗脫并收集，洗脫液混勻過(guò)0.22μm水系濾膜，待液相色譜檢測(cè)。
色譜柱：Bio-Bond® 5μm C4, 250x4.6mm (Cat.#: 84406)
流速：1.0mL/min
進(jìn)樣量：50μL
柱溫：30℃
檢測(cè)器：PDA 280nm
流動(dòng)相：A:乙腈 B:0.1%三氟乙酸水溶液
梯度設(shè)置：
(1) 肝素親和柱隨貨附贈(zèng)了乳鐵蛋白提取劑，有效增加了提取效率和凈化效率。
(2) 液體牛奶樣品在50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg添加濃度水平上的回收率均大于85%，回收驗(yàn)證合格。
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