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中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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LPS的穩(wěn)定性和化學(xué)分解

時(shí)間:2024/1/10閱讀:1032
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熱穩(wěn)定性

LPS(lipopolysaccharide,脂多糖)中性溶液在室溫放置數(shù)月,其生物學(xué)活性不發(fā)生明顯的改變4℃或低溫冰箱中,其生物學(xué)活性可保持?jǐn)?shù)年至數(shù)十年。冷凍干燥的LPS中性粉劑,在室溫或冰箱條件下可放置幾十年或更長(zhǎng)時(shí)間而不失去其生物學(xué)活性。

細(xì)菌LPS具有很強(qiáng)的耐熱性,一般的高壓滅菌不能使其滅活115℃ 30 min的濕熱僅能破壞25%左右的內(nèi)毒素活性。內(nèi)毒素在50%相對(duì)濕度下可被環(huán)氧乙烷去除活性。當(dāng)LPS的水溶液在不同溫度下處理時(shí)發(fā)現(xiàn)在200℃ 1h仍能檢測(cè)出內(nèi)毒素活性,而進(jìn)一步加熱到250℃ 3045min180℃ 3~4h則活性完-全消失。我國(guó)2000年版藥典內(nèi)毒素檢查法規(guī)定,玻璃器皿的熱原處理為250℃干烤1h以上。

酸堿穩(wěn)定性

室溫條件下LPS在酸性溶液中可發(fā)生部分降解,這主要由核心多糖與Lipid A間糖苷鍵的裂解引起,在加熱的條件下這一反應(yīng)可加速。在0.1N醋酸中,100℃ 45min可使LPS失去90%的生物活性。在加熱條件下﹐強(qiáng)酸溶液可使LPS分子徹-底破壞。50%的枸櫞酸pH 1.0可水解 Lipid A 的磷酸基團(tuán)或羥基脂肪酸等活性基團(tuán)。堿性因素主要導(dǎo)致Lipid A骨架上連接的磷酸酯鍵及脂肪酸酯鍵水解使Lipid A 結(jié)構(gòu)受到破壞,從而導(dǎo)致LPS分子失去活性。故LPS宜在中性﹑低溫的條件下保存。

輻照對(duì)LPS的影響

長(zhǎng)時(shí)間48h、大劑量的Co60照射后,LPS的結(jié)構(gòu)可以被完-全破壞。如有條件,對(duì)不能用干烤處理的實(shí)驗(yàn)器具,可用長(zhǎng)時(shí)間,大劑量的輻照清除LPS。

氧化劑對(duì)LPS活性的影響

過(guò)氧化氫是一種強(qiáng)氧化劑,具有防腐、滅菌除臭及清潔等作用。它分解后能釋放大量新生態(tài)氧可氧化分解LPS。過(guò)氧化氫主要裂解LPSLipid A還原端C1位的磷酸基團(tuán)。產(chǎn)生的單磷酸LPS,使其毒性下降,實(shí)驗(yàn)證明,單磷酸的Lipid A毒性明顯弱于野生型的Lipid A,這與過(guò)氧化氫降解LPS后毒性下降結(jié)果相符。

試劑檢測(cè)常用氧化消毒劑對(duì)大腸桿菌內(nèi)毒素的滅活作用,結(jié)果顯示,氯石灰溶液5000mg/L有效氯20℃作用30min、氯胺T溶液5000mg/L有效氯20℃作用70min可滅活95%以上的LPS活性。在60℃加熱條件下氯胺T滅活同量?jī)?nèi)毒素僅需40min,0.2%酸性高-錳-酸-鉀作用2min1.0%中性高-錳-酸-鉀作用160min可滅活95%以上的LPS。

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