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ECL化學發(fā)光底物(高靈敏度)的操作流程

時間:2025/4/24閱讀:120
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ECL化學化學發(fā)光底物(超敏)可為使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和低皮克級檢測靈敏度。 該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液,以出色性能、通用性和高性價比,滿足用戶的免疫印跡應用需求。

操作步驟:

1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉模和Western Blot步驟。 注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。

2、Western Blot最后一次洗模的同時配置發(fā)光工作液:分別取等體積的A液和B液,放入干凈容器中混合(注意吸取A液和B液的吸頭一定要分開,避免試劑污染)。 建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度有所降低。

3、Western Blot最后一次洗膜后,用鑷子將膜取出,用濾紙吸去多余的洗滌液(切勿接觸膜的蛋白面),然后置于一潔凈保鮮膜上或塑料容器內。

4、根據(jù)膜的大小按比例滴加配置好的ECL工作液到膜上,確保工作液均勻覆蓋在膜上,放置1-3分鐘。

5、取膜,用濾紙吸去多余的液體,將膜放在兩篇保鮮膜中間,隨后進行壓片檢測或化學發(fā)光成像儀檢測。

6、壓片檢測:將膜固定于X光膠片暗盒內(注意蛋白面向上)。 暗房內壓X光膠片,分別曝光不同的時間,如數(shù)秒到數(shù)分鐘,顯影沖洗。

7、化學發(fā)光成像儀檢測:將膜放置到化學發(fā)光成像儀內,參考儀器說明書進行檢測。 

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