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人S蛋白100B(S-100B)ELISA試劑盒說明書

時間:2009/8/18閱讀:182
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S蛋白100B(S-100B)ELISA試劑盒說明書

 

    本試劑盒僅供研究使用。

 

藥品名稱:

通用名:人S 蛋白100B(S-100B)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的:

    本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中S 蛋白100B(S-100B)含量。

實驗原理

    本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中人 S                蛋白 100B(S-100B)水平。用純化的人 S           蛋白

100B(S-100B)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的S

蛋白100B(S-100B)標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的S 蛋白100B(S-100B)待檢樣品,溫育后,加入生物

素標(biāo)記的抗IgG 抗體,再與鏈霉親和素-HRP 結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底

TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。

顏色的深淺和樣品中的S 蛋白100B(S-100B)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光

度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人S 蛋白100B(S-100B)濃度。

試劑盒組成

 

 1  20 倍濃縮洗滌液                50ml×1         標(biāo)準(zhǔn)品S1 1200 ng/L0.5ml×1

 

 2  鏈霉親和素-HRP                6ml×1          標(biāo)準(zhǔn)品S2  800 ng/L 0.5ml×1

 3  酶標(biāo)包被板                    12 孔×8 9      標(biāo)準(zhǔn)品S3  400 ng/L 0.5ml×1

 

 4  生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體  6ml×1                  標(biāo)準(zhǔn)品S4  200 ng/L  0.5ml×1

 

 5  顯色劑A                    6ml×1          標(biāo)準(zhǔn)品S5  100 ng/L 0.5ml×1

 

 6  顯色劑B                    6ml×1/  10     密封袋                  1

 

 7  終止液                      6ml×1   11     封板膜                  3

 

 8  樣品稀釋液                    6ml×1   12     說明書                  1

 

標(biāo)本要求

    1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。

    2.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

       馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

1. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)

   孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品、生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體、鏈霉親和素-HRP,

   其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,在

   樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl (樣品zui終稀釋度為5 倍),

   蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45 分鐘。

3. 配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30  秒后棄去,如此

   重復(fù)4 次,拍干。
5.
加生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體:每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體50μl                      (空白孔除外)。

   37℃溫育30 分鐘

6. 洗滌:操作同4。

7. 加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl 的鏈酶親和素-HRP                 (空白孔除外),輕輕振蕩混勻,

   37℃溫育30 分鐘。

8. 洗滌:操作同4。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

   15分鐘.

10.  終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止

   液后15 分鐘以內(nèi)進行。

 

計算

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD             值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未

   用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

   控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4.如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請先將樣本

   稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B 請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

線形范圍:

  50ng/L-1500ng/L

規(guī)格:

  96 人份/

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

 

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)提供各品牌ELISA試劑盒
詳情請登入: http://www.biohj.com
http://www.biohj.com/product.aspx?cid=1 

查詢,或    sale@biohj.com

 

 

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