人S蛋白100B（S-100B）ELISA試劑盒說明書

    本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人S 蛋白100B（S-100B）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中S 蛋白100B（S-100B）含量。

實驗原理

    本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中人 S                蛋白 100B（S-100B）水平。用純化的人 S           蛋白

100B（S-100B）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的S

蛋白100B（S-100B）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的S 蛋白100B（S-100B）待檢樣品，溫育后，加入生物

素標(biāo)記的抗IgG 抗體，再與鏈霉親和素-HRP 結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底

物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。

顏色的深淺和樣品中的S 蛋白100B（S-100B）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光

度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人S 蛋白100B（S-100B）濃度。

試劑盒組成

 1  20 倍濃縮洗滌液                50ml×1 瓶        標(biāo)準(zhǔn)品S1 （1200 ng/L）0.5ml×1瓶

 2  鏈霉親和素-HRP                6ml×1 瓶         標(biāo)準(zhǔn)品S2  （800 ng/L） 0.5ml×1瓶

 3  酶標(biāo)包被板                    12 孔×8 條 9      標(biāo)準(zhǔn)品S3  （400 ng/L） 0.5ml×1瓶

 4  生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體  6ml×1 瓶                  標(biāo)準(zhǔn)品S4  （200 ng/L  ）0.5ml×1瓶

 5  顯色劑A 液                   6ml×1 瓶         標(biāo)準(zhǔn)品S5  （100 ng/L） 0.5ml×1瓶

 6  顯色劑B 液                   6ml×1/瓶  10     密封袋                  1 個

 7  終止液                      6ml×1 瓶  11     封板膜                  3 張

 8  樣品稀釋液                    6ml×1 瓶  12     說明書                  1 份

標(biāo)本要求

    1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。

    2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

       馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

1. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)

   孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品、生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體、鏈霉親和素-HRP，

   其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，在

   樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl （樣品zui終稀釋度為5 倍），

   蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45 分鐘。

3. 配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30  秒后棄去，如此

   重復(fù)4 次，拍干。
5. 加生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體50μl                      （空白孔除外）。

   37℃溫育30 分鐘

6. 洗滌：操作同4。

7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl 的鏈酶親和素-HRP                 （空白孔除外），輕輕振蕩混勻，

   37℃溫育30 分鐘。

8. 洗滌：操作同4。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

   15分鐘.

10.  終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止

   液后15 分鐘以內(nèi)進行。

計算

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD             值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

   用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

   控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值），請先將樣本

   稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B 請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

線形范圍：

  50ng/L-1500ng/L

規(guī)格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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