人苯并吡-DNA（PAH-DNA）ELISA試劑盒使用說明書 

    本試劑盒僅供研究使用。 

藥品名稱：

通用名：人苯并吡-DNA（PAH-DNA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒用于測定人血清、血漿中人苯并吡-DNA（PAH-DNA）  含量。

實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人苯并吡-DNA（PAH-DNA） 水平。用純化的人苯

并吡-DNA（PAH-DNA） 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人苯

并吡-DNA（PAH-DNA） 再與HRP 標記的人苯并吡-DNA（PAH-DNA） 抗體結合，形成抗體-抗原

-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，

并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人苯并吡-DNA（PAH-DNA） 呈正

相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人苯并吡

-DNA（PAH-DNA） 濃度。

試劑盒組成

  1   20 倍濃縮洗滌液           30ml ×1 瓶      7    終止液                 6ml ×1 瓶

  2   酶標試劑                6ml ×1 瓶       8    標準品（270ng/L）        0.5ml ×1 瓶

  3   酶標包被板               12 孔×8 條       9    標準品稀釋液              1.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液               6ml ×1 瓶       10   說明書                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml ×1 瓶       11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml ×1/瓶       12   密封袋                 1 個

標本要求

    1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

       馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

    2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步驟

1.  標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標

    準品 100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二

    孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，

    混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔

    中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各

    取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混

    勻后從第七、第八孔中分別取 50μl  加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準

    品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，

    濃度分別為 180ng/L，120ng/L  ，60ng/L，30ng/L，  15ng/L ）。

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

    品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品 10μl （樣

    品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

    重復5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同 3。

8.  洗滌：操作同 5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

    15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止

    液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

計算

    以標準物的濃度為橫坐標，OD             值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

   用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

   控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值

   大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

   算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

檢測范圍：

  10ng/L -200ng/L

規(guī)格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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