生物芯片法檢測(cè)解脲脲原體

    解脲脲原體是zui小、zui簡(jiǎn)單的原核生物，球桿狀，直徑<150gm，細(xì)胞內(nèi)有1環(huán)狀DNA分子、游離的RNA及核糖體，缺少線粒體、溶酶體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等各種細(xì)胞器。近年來發(fā)現(xiàn)解脲脲原體引起的泌尿生殖系感染并不少見。解脲支原體寄生于患者或帶菌者的尿道和陰道黏膜，一般通過性接觸而被感染；嬰兒出生時(shí)可由產(chǎn)道獲得，甚少宮內(nèi)感染。臨床上常采用生物芯片技術(shù)對(duì)解脲脲原體抗體進(jìn)行檢測(cè)。

    [檢測(cè)方法]  生物芯片法

    [方法學(xué)原理]  以微孔濾膜為載體，利用微陣列技術(shù)將純化的解脲脲原體（Uu）I群、Ⅱ群特異性蛋白固定于同一膜片上，并利用微孑L濾膜的滲濾、濃縮、凝集作用，使抗原抗體反應(yīng)在固相膜上快速進(jìn)行，再以免疫膠體金作為標(biāo)記物直接在膜上顯色。顯色后的芯片放人芯片識(shí)別儀，在軟件的支持下對(duì)不同點(diǎn)陣的灰度值進(jìn)行分析。

    [標(biāo)本準(zhǔn)備]  取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內(nèi)不能進(jìn)行試驗(yàn)，分離血清后將其保存于一20℃環(huán)境中。檢測(cè)時(shí)，使樣本恢復(fù)至室溫。

    [試劑]

    1．蛋白芯片

    2．試劑A（洗滌液）

    3．試劑B（金溶膠試劑）

    [儀器]  蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)

    [檢測(cè)步驟]

    1．在芯片上標(biāo)記樣品編號(hào)。

    2．在芯片盒窗口內(nèi)滴加4滴試劑A，使膜表面*浸濕。

    3．待*滲入后，室溫環(huán)境下放置lmin，加待檢血清100~1。

    4．待血清*滲入后，滴加6滴試劑5．待試劑B*滲入后，滴加6滴試劑

    6．反應(yīng)完畢后30min內(nèi)，將芯片放人餅片閱讀系統(tǒng)進(jìn)行分析。

    [結(jié)果判斷]

    檢測(cè)結(jié)果1：Uul群、Uu 2群均為陰性，提示沒有被感染。

    檢測(cè)結(jié)果2：Uul群陽性、Uu 2群陰性，提示被Uul群感染。

    檢測(cè)結(jié)果3：Uu 2群陽性、Uul群陰性，提示被Uu 2群感染。

    檢測(cè)結(jié)果4：Uu 1群和Uu 2群均為陽性，提示被Uu感染，并且是復(fù)合感染。

    [正常參考值]  解脲脲原體陰性

    [注意事項(xiàng)]

    1．從2～8℃環(huán)境取出的芯片須在室溫環(huán)境下平衡至少lOmin后方可使用。

    2．采取血樣時(shí)患者無須禁食。

    3．新鮮血樣在2—8℃環(huán)境下存放不要超過48h；長(zhǎng)期保存的樣本應(yīng)在一20℃以下環(huán)境中凍存，避免反復(fù)凍融。

    4．芯片反應(yīng)窗口中的膜不能損傷或受潮。

    5．芯片應(yīng)在有效期內(nèi)使用。若陽性控制點(diǎn)不顯色說明芯片已失效，換新的芯片重做。

    6．殘余的標(biāo)本與使用過的芯片盒按生物危險(xiǎn)晶進(jìn)行消毒處理。

    7．操作時(shí)要戴手套，檢測(cè)完畢*洗手。

    8．如不慎讓任何試劑接觸眼部，立即用大量清水沖洗。

    [臨床意義]  解脲脲原體（Uu）分為兩大群14型，第l群為1、3、6、14型，占UU感染的90％-92％；第2群為2、4、5、7、8、9、10、13型，占UU感染的8％～10％。UU不侵入組織和血液，只能黏附于泌尿生殖道的上皮細(xì)胞表面，從細(xì)胞膜獲得脂質(zhì)和膽固醇，引起細(xì)胞損傷，并且解脲脲原體中的脲酶可以水解尿素產(chǎn)生大量的氨，對(duì)細(xì)胞有毒害作用。同時(shí)可吸附于精子表面，阻礙精子的運(yùn)動(dòng)。其產(chǎn)生的神經(jīng)氨酸酶樣物質(zhì)可干擾精子與卵子的結(jié)合，引起不育不孕；還可引起尿道結(jié)石；也可通過胎盤感染胎兒，引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎。