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檢測風(fēng)疹病毒抗體IgG(RUVAb-IgG)

時間:2009/10/12閱讀:1098
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檢測風(fēng)疹病毒抗體IgG(RUVAb-IgG) 

    [測定方法ELISA

    [方法學(xué)原理在微孔表面包被純化的風(fēng)疹病毒抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在風(fēng)疹病毒抗體IgG可與微孔上抗原相結(jié)合。然后洗去未結(jié)合物質(zhì),再加入酶聯(lián)液,與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗去過量的酶聯(lián)液。zui后加入底物和色原顯色液。在特定時間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng)。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中風(fēng)疹病毒抗體IgG含量呈正相關(guān)。通過酶標(biāo)儀與校正和對照相比,讀出結(jié)果。

    [標(biāo)本準(zhǔn)備靜脈抽血2ml,不抗凝。

    [試劑]

    1.微孔板

    2.樣品稀釋液

3HRP-抗人IgG酶結(jié)合物

4.陰性對照

    5.陽性對照

    6.洗滌劑

    7TMB顯色液

    [儀器設(shè)備酶標(biāo)儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。

    (測定步驟

    1.吸取5ul血清標(biāo)本加入250u1標(biāo)本稀釋液中,做151稀釋。

    2.吸取100ul稀釋過的血清、陽性對照、陰性對照和校正液不稀釋,加入微孔板內(nèi),設(shè)空白對照1孔。振蕩,混勻,去除孔內(nèi)液體中氣泡,室溫環(huán)境中孵育20min。

    3.棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗5次。

    4.每孔再加入100t~l酶聯(lián)結(jié)合物,室溫環(huán)境中孵育20min。

    5.棄去孔中酶聯(lián)液,用洗滌液洗5次。

    6.每孔加入100u1 TMB顯色液,室溫環(huán)境中孵育10min。

    7.每孔加入100ul終止液,終止反應(yīng),充分混勻。

    8.用酶標(biāo)儀波長為450nm)讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。

    [注意事項]

    1.整個檢測過程應(yīng)符合實驗室質(zhì)量手冊和生物安全守則規(guī)定,嚴(yán)防交叉污染。

    2.所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    3.試劑應(yīng)保存于2—8冰箱,使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min

    4.洗滌時各孔均應(yīng)加滿洗滌液,防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈,每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干。

    5.血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存,28可保存?d,冷凍保存可至6個月,避免反復(fù)凍融。   

    6.試劑在儲存或使用過程中,禁止過熱、曝曬或強(qiáng)光。

    [正常參考值]  RUV Ab-IgG陰性

    [臨床意義風(fēng)疹病毒為呼吸道傳播,人類普遍易感,育齡期婦女風(fēng)疹抗體陰性率各地報道不一,為0124%。

    一般認(rèn)為它主要引起青少年輕度發(fā)病,約70%為顯性感染,表現(xiàn)為斑丘疹、發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、白細(xì)胞升高,為自限性疾病。但母體感染,可通過胎盤傳給胎兒,引起先天性風(fēng)疹病毒感染,此病可誘發(fā)胎兒發(fā)生慢性心臟病、生長遲緩、肝脾大、畸形和其他異常癥狀。若為CRS患兒,則病死率較高,尤其是出生

后頭幾個月,出生1年內(nèi)死亡者可達(dá)10%~20%。嬰兒出生可無癥狀,也可在以后發(fā)育中出現(xiàn)異常。的血清學(xué)方法檢測育齡婦女血清狀態(tài)對于減少此類并發(fā)癥具有重要意義。若血液中存在風(fēng)疹病毒抗體,可抵抗此種病毒感染;缺乏此類抗體,可通過接種疫苗而獲得??贵w效價升高,說明是急性風(fēng)疹病毒感染,并有助于與其他皰疹病毒區(qū)別。風(fēng)疹病毒感染的孕婦應(yīng)留意可導(dǎo)致胎兒先天性感染的危險。

    RUV Ab-IgM抗體在疹后5—14d陽性率zui高,此后檢出率下降,有報道zui晚疹后66d仍陽性?;枷忍煨燥L(fēng)疹綜合征患兒IgM抗體陽性持續(xù)時間更長,持續(xù)1年者占50%,持續(xù)12年者占5%~10%。IgM抗體陽性,表示患者近期感染。因此,測定血清中風(fēng)疹IgM抗體,對于風(fēng)疹早期診斷以及決定患風(fēng)疹的孕婦是否需要終止妊娠非常重要。須注意的是,風(fēng)疹再感染者雖少數(shù)能查到IgM抗體,但滴度低,持續(xù)時間短;風(fēng)疹病毒活疫苗接種后,絕大多數(shù)也能測出IgM抗體。

風(fēng)疹患者測出RUV Ab—IgM抗體的同時,幾乎均可檢出RUVAb—IgG抗體,并持續(xù)升高,12個月內(nèi)仍有所上升,以后逐漸下降,·412個月降低至基線水平,抗體持續(xù)時間可達(dá)數(shù)年至數(shù)十年,甚至終身?;謴?fù)期血清比急性期血清的抗體滴度有4倍或4倍以上升高,可作出近期風(fēng)疹感染的診斷。測定風(fēng)疹IgG抗體,可以了解人群風(fēng)疹隱性感染水平和考核疫苗的免疫效果。 

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