小鼠雌二醇（E2）ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用

檢測范圍：20 pg/ml -1000 pg/ml

特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的雌二醇，且與其他相關物質(zhì)基本無交叉反應。

有效期：6個月（2-8℃避光保存）

預期應用：ELISA法定量測定小鼠血清，血漿及其它相關生物液體中雌二醇含量。

說明

1.        濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

2.        剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。

實驗原理

采用競爭酶聯(lián)免疫法法檢測雌二醇含量。首先用羊抗兔包被微孔板，制備成固相二抗，然后加入待測標本、辣根過氧化物酶標記的雌二醇以及抗雌二醇抗體，使之形成包被二抗-抗雌二醇抗體-雌二醇（HRP）復合物。經(jīng)顯色后在酶標儀測定吸光值（OD值），通過計算機或作圖擬合濃度-吸光度曲線，反算出待測標本中雌二醇含量。

試劑盒組成及試劑配制

1.        酶聯(lián)板（Assay plate ）：                                   一塊（96孔）。

2.        標準品（Standard）：                                    5瓶（凍干品）。

標準品為凍干品，使用前分別用0.5ml蒸餾水溶解，溶解后濃度分別為：

3.        酶結合物（HRP-conjugate）：                              1×6ml/瓶。

4.        抗體（Antibody）：                                        1×6ml/瓶。

5.        顯色劑A（Substrate A）：                                   1×7ml/瓶。

6.        顯色劑B（Substrate B）：                                   1×7ml/瓶。

7.        濃洗滌液（Wash Buffer）：    1×15ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。

8.        終止液（Stop Solution）：                                   1×7ml/瓶

需要而未提供的試劑和器材

1.        標準規(guī)格酶標儀

2.        高速離心機

3.        電熱恒溫培養(yǎng)箱

4.        干凈的試管和Eppendof管

5.        系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6.    蒸餾水，容量瓶等

標本的采集及保存

1.        血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.      血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

操作步驟

1.        將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時，取濃縮洗滌液，根據(jù)當批檢測數(shù)量，用蒸餾水上1：20稀釋，混勻后備用。

2.        標準品Standard 1- Standard 5，*次使用前先用0.5ml蒸餾水溶解，放置混勻后使用。

3.        將酶標板取出，設一個空白對照孔、不加任何液體；每個標準點依次各設兩孔，每孔加入相應標準品50ul；其余每個檢測孔直接加待測標本50ul。

4.        每孔加入酶結合物50ul（空白對照孔除外），再按同樣順序每孔加入抗體50ul，充分混勻，貼上不干膠封片，置37℃溫育2小時。

5.        手工洗板，棄去孔內(nèi)液體。洗滌液注滿各孔，靜置10秒甩干，重復三次后拍干；洗板機洗板，選擇洗滌三次程序，洗板后拍干。

6.        每孔加顯色劑A液50μl，顯色劑B液50μl，振蕩混勻后，37℃避光顯色15分鐘，每孔加終止液50μl。

7.        用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm，先用空白孔調(diào)零點，然后測定各孔OD值。

數(shù)據(jù)處理

1.        手工作圖：用雙對數(shù)坐標紙，以標準品濃度為橫軸，以對應的0D值為縱軸，畫出平滑曲線或直線，在曲線上按照待測血清OD值找到對應的濃度值。

2.        計算機：使用線性擬合功能，應將標準品S1-S5的濃度取對數(shù)（Log（濃度））作為X，將對應的OD值減去空白對照孔OD值后取對數(shù)（Log（OD值-NSB））作為Y，進行線性擬合。再從擬合線上計算出待測血清濃度。

注意事項

1.        從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及所需預包被板條應置室溫

（18-25℃）平衡30分鐘后方可使用，余者應及時封好口，放回2-8℃中避光保存，以備后用。

2.        使用前試劑應搖勻。

3.        結果判斷須在反應終止后10分鐘內(nèi)完成。

4.        不同批號的試劑不可混用。

5.        加樣時應注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。

6.        操作時，試劑盒內(nèi)每種試劑各使用一個吸頭，每一種標準品使用一個吸頭，每一個樣品各使用一個吸頭，吸頭一次性使用。  

7.         

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學領域的。致力于各種ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、一抗二抗、細胞因子、生物試劑、移液器、耗材的銷售推廣及服務工作。
咨詢：      http://www.biohj.com  ：1284882975

小鼠雌二醇（E2）ELISA試劑盒使用說明書