本試劑盒僅供研究使用。

通用名：小鼠鉤端螺旋體IgG酶聯(lián)免疫分析試劑盒

本試劑盒定性測(cè)定小鼠血液、或其它相關(guān)組織中鉤端螺旋體IgG

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中小鼠鉤端螺旋體IgG。用純化的小鼠鉤端螺旋體IgG抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中小鼠鉤端螺旋體IgG相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的羊抗鼠抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中小鼠鉤端螺旋體IgG的存在與否。

1．標(biāo)本處理：（1）血清或血漿：可直接用于檢測(cè)

            （2）細(xì)胞培養(yǎng)物：移去細(xì)胞培養(yǎng)液，收集培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞加入離心管中。

2500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄上清。向細(xì)胞團(tuán)中加入500μl生理鹽水，室溫孵育1小時(shí)（期間不時(shí)旋渦混合）后待測(cè)。

2．標(biāo)本要求：不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

1.         編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.         加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至1000ml后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl（或一滴），空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl（或一滴），再加入顯色劑B 50μl（或一滴），輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

10.     終止：每孔加終止液50μl（或一滴），終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.     測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.15

 臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.20

 陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為小鼠鉤端螺旋體IgG陰性

 陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為小鼠鉤端螺旋體IgG陽(yáng)性

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。

8. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)..

     96人份/盒

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

 

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