此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。豬ELISA試劑盒很輕易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。豬ELISA試劑盒實驗基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。

    用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式開釋，因此，在測定此類激素時，有必要在緊密親密相連的時間距離內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值。因此在豬ELISA試劑盒測定中試劑的預(yù)備zui為樞紐的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。加血清樣本及反應(yīng)試劑在現(xiàn)在的ELISA試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。