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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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生物制藥殘留DNA提取試劑盒（ biohub B48202 ）
生物制藥殘留DNA提取試劑盒（NaI法）
殘留DNA提取試劑盒遵照中國(guó)藥典記載的NaI法，適用于疫苗和治療用生物制品所含宿主細(xì)胞殘余DNA的提取。
殘留DNA提取試劑盒可以提取樣品中含有的極微量的DNA，回收率較高。DNA的提取操作時(shí)間為60-90 分鐘。提取的DNA可以通過(guò)qPCR進(jìn)行定量。
生物制藥殘余DNA抽提試劑盒 （NaI法DNA提取試劑盒）
特點(diǎn)
● 遵照中國(guó)藥典登載的NaI法*1
● 高回收率
● 單管操作（無(wú)需換管） ，耗時(shí)僅60-90 min
● 不需要Phenol和Chloroform等有機(jī)溶劑
● 兼容多種DNA
● 高回收率
● 單管操作（無(wú)需換管） ，耗時(shí)僅60-90 min
● 不需要Phenol和Chloroform等有機(jī)溶劑
● 兼容多種DNA
*1 為使DNA檢測(cè)方法與標(biāo)準(zhǔn)保持同步，中國(guó)藥典（The Chinese Pharmacopoeia）宣布建立殘留細(xì)胞DNA檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。NaI法將作為殘留DNA提取方法，被新增至2020版的中國(guó)藥典中。
◆ 原理
1. 使樣品中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)溶于NaI；
2. Isoproanol與糖原選擇性地共沉淀DNA。
2. Isoproanol與糖原選擇性地共沉淀DNA。
◆ 使用方法
q 1、每個(gè)樣品添加500uL或稀釋至2 mL微離心管
q 2、加20uL洗滌劑組合液到每管，并輕輕的渦旋
q 3、選項(xiàng)：如果高濃度的蛋白質(zhì)干擾DNA提取和DNA分析，每個(gè)樣品中吸取添加20uL消化蛋白酶K（10mg/ml），在60°C， 20min，然后在95°C滅酶 5min
q 4、加500uL NaI溶液到每個(gè)微管中，并輕輕的渦旋
q 5、50°C孵育10分鐘
q 6、加900uL異丙醇渦旋
q 7、室溫孵化30min
8、離心機(jī)12000轉(zhuǎn)15min
9、輕輕倒出或吸出上清液
q 10、添加1.8ml洗滌緩沖液（含酒精），渦旋
11、離心機(jī)12000轉(zhuǎn)10min
q 12、輕輕倒出或吸出上清液
q 13、風(fēng)干DNA
q 14、添加20-60uL水輕輕渦旋溶解DNA
q 15、純化的DNA可進(jìn)行PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、酶切、DNA測(cè)序、熒光染色法
注意事項(xiàng)：
1） 用于稀釋NaI溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。
2） 配制好的洗滌溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原 溶液到無(wú)菌離心管中至合適體積即可。
3） 在保存期間NaI溶液會(huì)結(jié)晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。
4） 提取步驟應(yīng)在DNA 變性之前，因此重要的是使用無(wú)菌技術(shù)盡可能降低DNA 污染。預(yù)先包裝好的無(wú)菌吸管、無(wú)菌試管和手套都要經(jīng)過(guò)此步驟。
1） 用于稀釋NaI溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。
2） 配制好的洗滌溶液（B）在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原 溶液到無(wú)菌離心管中至合適體積即可。
3） 在保存期間NaI溶液會(huì)結(jié)晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。
4） 提取步驟應(yīng)在DNA 變性之前，因此重要的是使用無(wú)菌技術(shù)盡可能降低DNA 污染。預(yù)先包裝好的無(wú)菌吸管、無(wú)菌試管和手套都要經(jīng)過(guò)此步驟。
5) 請(qǐng)于各步驟使用攪拌器將溶液攪拌均勻。樣品溶液里含有DNA酶時(shí)，進(jìn)行步驟2之前請(qǐng)先進(jìn)行步驟3。步驟4里樣品溶解不*時(shí)，請(qǐng)把保溫溫度升至40-60℃幫助溶解。但是含有部分蛋白（γ-球蛋白）或高濃度蛋白的樣品（＞50mg/ml），加熱可能會(huì)導(dǎo)致蛋白聚集，請(qǐng)注意。
◆ 應(yīng)用案例
DNA spiking test（加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)）
DNA Extractor Kit( biohub B48202 )可以高產(chǎn)量提取殘留DNA，甚至少量殘留DNA。
◆ 試劑盒構(gòu)成
| 內(nèi)容物 | 內(nèi)容量 |
| NaI法溶液 | 25ml |
| 洗滌劑組合液 | 1ml |
| 洗滌緩沖液（無(wú)酒精） | 30 mL |
| 糖原溶液 | 100uL |
備注：每種成分不單獨(dú)出售
試劑盒不包含：
乙醇（洗滌緩沖液）
異丙醇（用于DNA沉淀）
2ml微復(fù)合管（離心或等效的）
微型離心機(jī)（離心或等效的）
◆ biohub B48202產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 儲(chǔ)存 | 包裝 |
| B48202 | DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method(Sodium Iodide Method) 殘留DNA提取試劑盒（NaI法） | 2-10℃ | 50 tests |
■ 保存
2 - 10℃，試劑盒的保存期為2 - 3 年。
2 - 10℃，試劑盒的保存期為2 - 3 年。
在工業(yè)生產(chǎn)的疫苗和治療用生物制品（干擾素、白細(xì)胞介素、單克隆抗體、重組蛋白）中，宿主細(xì)胞殘余DNA污染直接影響終產(chǎn)品和整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量和產(chǎn)量，可能引起動(dòng)物致瘤、感染病毒DNA等嚴(yán)重后果，中國(guó)藥典、WHO、EU、FDA對(duì)宿主細(xì)胞DNA殘留*都有規(guī)定。傳統(tǒng)的DNA提取方法蛋白酶K-SDS法在SDS的穩(wěn)定和促進(jìn)下降解細(xì)胞中的蛋白質(zhì)特別是核酶，再經(jīng)有機(jī)溶劑萃取得到高質(zhì)量的DNA，但毒DNA和生物制品宿主細(xì)胞殘余DNA的提取試劑盒。使用新型提取步驟，用（NaI）作為促溶劑，穩(wěn)定且靈敏度高、時(shí)間短，無(wú)有毒溶劑，無(wú)需復(fù)雜和費(fèi)力操作，即可從樣品中得到高質(zhì)量和高回收率的DNA。
