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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒-上海起發(fā)現(xiàn)貨
品牌：yisemed
貨號(hào)：MD001
規(guī)格：48Reaction
細(xì)胞《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》詳細(xì)介紹?
一、《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》主要用途??
《一步法恒溫支原體檢?測(cè)試劑盒》主要用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品中是否含有支原體污染，該試劑盒僅用于基礎(chǔ)科研。
二、《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》擴(kuò)增原理??
《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》采用*的恒溫基因擴(kuò)增技術(shù)和顯色技術(shù)，對(duì)樣品的支原體基因組DNA進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增，反應(yīng)完后，通過反應(yīng)管的顏色即可對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷。
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三、《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》八大優(yōu)點(diǎn)??
《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》八大優(yōu)點(diǎn)
?（1） 方便，整個(gè)檢測(cè)過程只需一步即可完成。
（2） 省時(shí)，整個(gè)檢測(cè)過程只需1小時(shí)，而PCR法通常需要2-3小時(shí)。
（3）靈敏度良好，一般比30個(gè)循環(huán)普通PCR靈敏度高。
（4）無需樣品的前處理。由于細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)天后，培養(yǎng)液中經(jīng)常含有嚴(yán)重抑制PCR擴(kuò)增的代謝物，所以樣品的前處理一般是PCR法*的環(huán)節(jié)。而RD-RCA擴(kuò)增不受抑制，無需樣品的前處理。
（5）無需樣品的離心濃縮，檢測(cè)只需1微升培養(yǎng)液即可。
（6）無需用到PCR儀、電泳槽、凝膠成像儀、離心機(jī)等儀器，整個(gè)檢測(cè)只需一個(gè)水浴鍋即可完成。
（7）無需電泳，無需接觸EB等誘癌物質(zhì)。根據(jù)反應(yīng)管的指示劑，肉眼即可判斷反應(yīng)結(jié)果。
（8）產(chǎn)品穩(wěn)定性好，凍干型產(chǎn)品可以在室溫至少放置2個(gè)月，-20 ℃至少可以放置2年。
四、 《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》法與PCR法的靈敏度和抗干擾性比較??
將有支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)液上清用水做系列稀釋（RD-RCA做10倍系列稀釋、PCR做5倍系列稀釋），而后分別用《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》和普通PCR進(jìn)行支原體檢測(cè)。
?如右圖所示，采用RD-RCA法的《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》在稀釋10000倍后仍呈明顯的陽性而普通PCR(30 cycles)在稀釋125倍后呈勉強(qiáng)的弱陽性，二者靈敏度至少相差80倍。
另外一個(gè)值得高度注意的是：用細(xì)胞培養(yǎng)上清原液進(jìn)行PCR檢測(cè)居然呈明顯的陰性！而原液用水稀釋5倍后，PCR卻呈陽性。說明：細(xì)胞培養(yǎng)上清原液含有強(qiáng)烈抑制PCR的代謝物！
與此形成鮮明對(duì)比的是：采用RD-RCA法的《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》卻能在細(xì)胞培養(yǎng)上清原液中檢測(cè)出支原體污染！說明：同樣的代謝產(chǎn)物雖然強(qiáng)烈抑制PCR卻不會(huì)抑制RD-RCA的正常擴(kuò)增。
這是RD-RCA法的巨大優(yōu)勢(shì)！如此，RD-RCA就不需要進(jìn)行樣品的稀釋或者進(jìn)行支原體DNA的抽提等的前處理。
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特別提醒：
該實(shí)驗(yàn)也說明：如果使用的PCR法支原體檢測(cè)試劑盒沒有內(nèi)參對(duì)照，而直接使用細(xì)胞培??養(yǎng)上清原液進(jìn)行PCR檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果即使為陰性，也不能說明其沒有支原體污染，極有可能是PCR的擴(kuò)增被細(xì)胞的代謝產(chǎn)物抑制了！這個(gè)問題絕大部分進(jìn)行支原體檢測(cè)的人員都不會(huì)注意，這是利用無內(nèi)參對(duì)照的PCR法進(jìn)行支原體檢測(cè)的致命弱點(diǎn)!
【注：由于本公司現(xiàn)在生產(chǎn)的《PCR法支原體檢測(cè)試劑盒》（貨號(hào)：PM008），含內(nèi)參對(duì)照，已經(jīng)可以區(qū)分真陰性樣品（樣品無支原體污染。電泳結(jié)果：有內(nèi)參條帶，無支原體特異條帶）和假陰性樣品（PCR被代謝產(chǎn)物抑制。電泳結(jié)果：內(nèi)參條帶和支原體特異條帶都沒有）。詳情請(qǐng)參考本公司生產(chǎn)的《PCR法支原體檢測(cè)試劑盒》說明書】
有關(guān)PCR的擴(kuò)增會(huì)被細(xì)胞的代謝產(chǎn)物抑制的問題，Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit（貨號(hào)MP0035-1 kit）的PCR法支原體檢測(cè)試劑盒說明書中也特別提到了這點(diǎn)，其強(qiáng)烈建議用試劑盒進(jìn)行DNA提取后再進(jìn)行檢測(cè)?？梢娺@是利用PCR法進(jìn)行支原體檢測(cè)過程中普遍遇到的問題，應(yīng)該引起科研工作者的高度重視！否則，由此引起的假陰性（培養(yǎng)時(shí)間越久，概率越高），將使無內(nèi)參對(duì)照的PCR法進(jìn)行的支原體檢測(cè)變得毫無意義！?
五、 《一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒》產(chǎn)品形式
本公司所有恒溫基因檢測(cè)產(chǎn)品主要以凍干品的形式提供（如右圖所示）?！兑徊椒ê銣刂гw檢測(cè)試劑盒》同樣以凍干品的形式提供。
采用先進(jìn)的凍干技術(shù)，將所有擴(kuò)增成分都凍干在一個(gè)0.2 mL的PCR管中，使用時(shí)只需加入水化液和待測(cè)樣品，整個(gè)檢測(cè)過程一步即可完成，非常簡單。
此外，由于凍干品的穩(wěn)定性非常好，可以在室溫保存至少2個(gè)月，這樣非常方便運(yùn)輸和儲(chǔ)存，也非常適合在野外或者污染點(diǎn)進(jìn)行即時(shí)檢測(cè)。該工藝的創(chuàng)新極大的擴(kuò)展了相關(guān)產(chǎn)品的市場(chǎng)應(yīng)用前景。
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