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biontex Proteofection常見問題解答

2021-12-10  閱讀(1189)

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biontex Proteofection常見問題解答


PROTEOfectene®PROTEOfectene® AB是含有 Proteofectene®AB 的脂質(zhì)制劑,專為抗體的蛋白轉(zhuǎn)染而開發(fā)。

您感興趣的蛋白質(zhì)或抗體中存在的任何雜質(zhì)、污染物或添加劑都可能影響PROTEOfectene®PROTEOfectene® AB 的遞送效率。因此,使用盡可能純的蛋白質(zhì)/抗體。
如果與感興趣的蛋白質(zhì)相比存在過多的穩(wěn)定劑,例如去污劑,則可以抑制遞送。穩(wěn)定劑如甘油或其他類似的添加劑不會干擾蛋白質(zhì)的傳遞。

抗體溶液中的 BSA 會抑制抗體遞送!0.1% 到 2% BSA 是抗體溶液中的常見濃度——這意味著 1 mg/ml 到 20 mg/ml。在這些溶液中,BSA 的比例大大超過了抗體。BSA 在抗體PROTEOfectene® AB 復(fù)合物形成期間與抗體競爭,因此抑制抗體遞送。

如果防腐劑如疊氮化納以高濃度存在,則可能會導(dǎo)致細(xì)胞毒性。如有必要,可通過透析去除。

PROTEOfectene®是一種基于脂質(zhì)的制劑,可與蛋白質(zhì)形成非共價復(fù)合物。這些復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)化,蛋白質(zhì)被釋放到細(xì)胞質(zhì)中。
只需將您感興趣的蛋白質(zhì)與PROTEOfectene®在 1xPBS 中孵育10-15 分鐘,用無血清培養(yǎng)基稀釋,然后將混合物應(yīng)用于您的細(xì)胞,3-48 小時后,您就可以檢測蛋白質(zhì)活性了。

由于它們的特定特性,某些蛋白質(zhì)可能無法通過PROTEOfectene®有效遞送。因此,在生理條件下帶正電荷的堿性蛋白質(zhì)很難被引入細(xì)胞。另一個原因可能是前蛋白的雜質(zhì)(例如去污劑、防腐劑、穩(wěn)定劑)。

與使用轉(zhuǎn)染 DNA 的基因表達(dá)研究相比,蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染 (Proteofection) 的速度非???,因為它繞過了轉(zhuǎn)錄和翻譯等細(xì)胞過程。此外,避免了潛在有害的隨機 DNA 整合到目標(biāo)細(xì)胞的基因組中。PROTEOfectene®可以將活性蛋白質(zhì)直接輸送到細(xì)胞中,用于涉及細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和許多其他因素的各種問題的研究。

R-藻紅蛋白 (100 µg/ml) 與PROTEOfectene® 一起提供作為陽性對照。以 1:2 的蛋白質(zhì):脂質(zhì)比使用它(對于 1 μg 蛋白質(zhì),需要2 μl PROTEOfectene®)。
R 藻紅蛋白已被輸送到許多不同的細(xì)胞中,因此成功輸送的可能性很高。提供此對照蛋白是為了幫助您設(shè)置實驗,并且應(yīng)該用于您實驗的每個新細(xì)胞系。如果細(xì)胞毒性是一個問題,陽性對照使用戶能夠確定遞送的蛋白質(zhì)是否影響細(xì)胞活力。

FITC 標(biāo)記的 IgG(陽性對照,100 μg/ml)是一種熒光標(biāo)記的抗體(免疫球蛋白)作為陽性對照。以 1:1 – 1:2 的抗體:試劑比例使用(對于 1 μg 抗體,需要 1-2 μl PROTEOfectene® AB)。提供此對照抗體是為了幫助您設(shè)置實驗,并且應(yīng)該用于您實驗的每個新細(xì)胞系。FITC-IgG 已被輸送到許多不同的細(xì)胞中;因此,成功運輸?shù)目赡苄院芨摺?/span>

 

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