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細胞增殖與細胞毒檢測試劑盒(MTT法)
產品編號 | 包裝 | 價格 |
130005-M | 300T | 185.00 |
130005-M1 | 500T | 328.00 |
130005-M2 | 1000T | 572.00 |
噻唑蘭(Methylthiazoletetrazolium, MTT)是一種可接受氫離子的淡黃色唑氮鹽染料,被活細胞線粒體呼吸鏈中的琥珀酸脫氫酶和細胞色素C還原,使tetrazolium環(huán)開裂,生成水不溶的深紫色結晶產物甲簪(formazan)。死細胞因喪失琥珀酸脫氫酶活性,因此甲簪的生成量僅與活細胞數目成正比。在特定溶劑存在的情況下,甲簪可以被*溶解,借助酶標儀測定570nm波長附近的吸光度,可推算出活細胞的數量或細胞存活率。細胞增殖速度越快,則甲簪生成的量越多,吸光度越高;細胞毒性越大,則甲簪生成的量越少,吸光度越低。由于操作簡便,成本低,不污染環(huán)境,克服了傳統(tǒng)的同位素摻入或釋放實驗等操作復雜,成本高,對儀器設備和實驗室條件要求高,難于防護等因素,而被廣泛地用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。
賽馳生物開發(fā)生產的細胞增殖與細胞毒檢測試劑盒(Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit) 以MTT為指示劑,在經典操作方法的基礎上,采用了*的甲簪溶解液,可以直接溶解甲簪,而無需離心去除原有的培養(yǎng)液,故可避免因甲簪部分被吸除而引起的操作誤差,具有本底低,靈敏度高,線性范圍寬,操作簡便等特點。
包裝清單
細胞增殖與細胞毒檢測試劑盒 | 130005-M | 130005-M1 | 130005-M2 |
MTT染色液 | 6ml | 10ml | 10ml×2 |
Formazan溶解液 | 30ml | 50ml | 100ml |
說明書 | 1 份 |
保存條件
MTT溶液-20℃保存,一年有效;Formazan溶解液室溫或-20℃保存。
使用說明
1. 細胞的增殖和細胞毒實驗,一般可在96孔細胞培養(yǎng)板中進行。
2. 每孔加入100微升細胞懸液。細胞的數量取決于實驗目的和培養(yǎng)時間。增殖實驗每孔通常加入103個以上數量的細胞;細胞毒性實驗每孔至少加入5x103個或以上數量的細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等因素確定)。
3. 接種的細胞按照實驗需要,送入細胞培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。增殖實驗通常要給予0-10微升特定的藥物或生長因子進行刺激。細胞毒實驗通常要給予0-10微升抑制因子或細胞毒藥物;
4.培養(yǎng)結束后,每孔加入20微升MTT溶液,在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育3-6小時;
5.孵育結束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃細胞培養(yǎng)箱內再繼續(xù)孵育,直至在鏡下觀察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小時左右,紫色結晶會全部溶解。如果紫色結晶較小較少,溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大較多,溶解的時間會略長。
6. 在570nm測定吸光度。如無570nm濾光片, 560-600nm范圍的濾光片均可使用。