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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

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BioGenes 代理

2015-12-30  閱讀(1054)

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2015年12月29日 - 上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑 - 上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑

 BioGenes新一代宿主細(xì)胞殘留蛋白(HCPELISA檢測(cè)試劑盒

準(zhǔn)確定量檢測(cè)殘留的宿主細(xì)胞殘留蛋白(HCP)是病毒性疫苗或基因工程產(chǎn)品生產(chǎn)的關(guān)鍵質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。BioGenes公司優(yōu)化的360 - HCP檢測(cè)試劑盒檢測(cè)宿主細(xì)胞蛋白(HCP)比傳統(tǒng)檢測(cè)具有顯著的優(yōu)勢(shì)。通過提供四個(gè)試劑盒包(每個(gè)包使用不同的anti-HCP抗體),通過比較選取zui適檢測(cè)試劑盒檢測(cè)HCP,增加了HCP檢出的特異性和靈敏度。因此可zui大限度的減少了anti-HCP抗體不能*檢測(cè)終產(chǎn)品中HCP的可能性。而傳統(tǒng)的HCP檢測(cè)只是使用一個(gè)抗體進(jìn)行檢測(cè),因此增加了部分HCP不能檢出的可能性。

 

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BioGenes產(chǎn)品說明書:

1、CHO|360-HCP ELISA

CHO|360-HCP ELISA是為中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)作為宿主細(xì)胞的生物制品進(jìn)行HCP檢測(cè)的試劑盒,擁有高度特異性和靈敏度,覆蓋率更多的CHO蛋白譜。

通過用模擬轉(zhuǎn)染CHO-K1 CHO-S細(xì)胞的HCP免疫家兔或山羊,然后結(jié)合BioGenes公司*的抗原和抗體制備技術(shù)(優(yōu)化的蛋白純化技術(shù))得到HCP多克隆抗體。使用事先準(zhǔn)備好的不同抗原(總HCP或分級(jí)HCP)每個(gè)分級(jí)HCP分別用于免疫動(dòng)物,因而得到四個(gè)不同HCP ELISA檢測(cè)試劑盒(AD),這四個(gè)試劑盒共同組成360 - HCPHCP ELISA檢測(cè)體系。

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HCP超級(jí)檢出率:

CHO|360-HCP ELISA試劑盒經(jīng)大量的模擬CHO-HCP樣本檢測(cè)測(cè)試。在大多數(shù)情況下可以從四個(gè)檢測(cè)試劑盒中找出*的HCP檢出率的試劑盒。如上圖樣本4可以看出,D型試劑盒可以檢出大于90%HCP,比ABC三種類型更為適用于該樣本,而普通商業(yè)化的檢測(cè)試劑盒只能檢出約20%HCP。

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更高的檢測(cè)特異性:

LOD0.5 – 1.0 ng/mL

LOQ 2 – 3 ng/mL

檢出范圍:2 – 100 ng/mL

2、E.coli|360-HCP ELISA

E.coli |360-HCP ELISA是為大腸桿菌(E.coli)作為宿主細(xì)胞的生物制品進(jìn)行HCP檢測(cè)的試劑盒,擁有高度特異性和靈敏度,覆蓋率更多的E.coli蛋白譜。

E.coli|360-HCP Assay試劑盒是利用在不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下發(fā)酵的W3110BL21(DE3) 細(xì)胞株產(chǎn)生四種具有不同HCP蛋白譜的抗原。然后用這四種抗原免疫山羊得到四種不同的HCP ELISAs試劑盒(AD),四者共同構(gòu)成E.coli|360-HCP Assay 檢測(cè)體系??赏ㄟ^考馬斯染色E.coli HCP和不同抗體的2D western blotting 檢測(cè)確定zui高特異性的試劑盒。

 

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HCP超級(jí)檢出率:

E.coli |360-HCP ELISA試劑盒經(jīng)大量的模擬大腸桿菌-HCP樣本檢測(cè)測(cè)試。如上圖可以看出,可以看出,B型試劑盒可以檢出樣本1中大于 80%HCP,A型試劑盒是樣本23的*檢測(cè)試劑盒,而樣本5的*檢測(cè)試劑盒是D型試劑盒。

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更高的檢測(cè)特異性:

LOD0.5 – 1.0 ng/mL

LOQ 2 – 3 ng/mL

檢出范圍:2 – 100 ng/mL

 

3、*試劑盒選擇的方法:

如實(shí)驗(yàn)中選取中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)作為宿主細(xì)胞,則選擇CHO|360-HCP ELISA試劑盒進(jìn)行HCP檢測(cè);如實(shí)驗(yàn)中選取大腸桿菌(E.coli)作為宿主細(xì)胞,則選擇E.coli |360-HCP ELISA試劑盒進(jìn)行HCP檢測(cè)。然后根據(jù)以下方法對(duì)具體的試劑盒型號(hào)進(jìn)行選擇。

1)預(yù)實(shí)驗(yàn)選取法:

該方法是采用The 360-HCP ELISAs Starter Set包(內(nèi)含A-D型四種不同的檢測(cè)試劑盒),通過預(yù)實(shí)驗(yàn)選取zui適試劑盒類型進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)流程如下圖:

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2BioGenes公司鑒定服務(wù)推薦法

除上述客戶自行確定*試劑盒法外,BioGenes還提供試劑盒性能試驗(yàn)并推薦*試劑盒的服務(wù)。

方法1

360-HCP ELISA kits (type A to D)檢測(cè)含HCP樣本,流程為:

1)客戶提供4-8個(gè)不同純化階段的樣本;

2)兩次重復(fù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確定;

3)每個(gè)樣品多達(dá)4個(gè)稀釋倍數(shù);

4BioGenes推薦一個(gè)*的ELISA檢測(cè)試劑盒類型,同時(shí)附一個(gè)簡(jiǎn)短的推薦報(bào)告。

方法2

2-D蛋白印記分析模擬的HCP2-D蛋白印記分析可以獲得抗HCP抗體對(duì)存在于宿主細(xì)胞株中全部HCP的范圍評(píng)估信息,以獲取確信的zui適抗體類型和水平,流程為:

12-D 分離和考馬斯藍(lán)銀染色和銀染;

2)使用不同抗體稀釋度進(jìn)行免疫印跡;

3)完成包括蛋白范圍的報(bào)告;

4)推薦zui適ELISA檢測(cè)試劑盒類型,同時(shí)附一個(gè)簡(jiǎn)短的推薦報(bào)告。

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