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M199基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制步驟

時(shí)間:2014-11-3閱讀:8768
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M199基礎(chǔ)培養(yǎng)基是 Morgan 等在 1950 年zui早開(kāi)發(fā)的一種化學(xué)成份明確的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,zui早用于雞胚心細(xì)胞的培養(yǎng)。目前在補(bǔ)充了血清后可用于病毒及疫苗的生產(chǎn),也用于多種非轉(zhuǎn)化的動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。  

高壓滅菌型是該培養(yǎng)基的熱穩(wěn)定配方,可保證其營(yíng)養(yǎng)成份在高壓高熱中不受影響。該配方中不含L-谷氨酰胺及碳酸氫鈉,需在高溫滅菌后添加。  

產(chǎn)品型號(hào)  

M199基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉  

M199基礎(chǔ)培養(yǎng)基,不含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉  

M199基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含 L-谷氨酰胺,含 HEPES,不含碳酸氫鈉  

M199基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含 L-谷氨酰胺,含 HEPES,不含碳酸氫鈉,含 Hank 鹽  

M199 基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含 L-谷氨酰胺,不含酚紅,不含碳酸氫鈉  

M199 基礎(chǔ)培養(yǎng)基,高壓滅菌型,不含 L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉  

產(chǎn)品規(guī)格  

干粉(1L、10L 及 100L); 液體(500 ml)  配制方法  

干粉培養(yǎng)基的過(guò)濾配制  

  1. 將 1 升量的干粉在 950ml 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)純凈水中*溶解  
  2. 加入 2 克碳酸氫鈉,繼續(xù)攪拌至*溶解  
  3. 用 1N 鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整到要求的 pH,將溶液定溶至 1000ml  
  4. 在超凈臺(tái)內(nèi)用 0.22um 濾膜正壓過(guò)濾  
  5. 將培養(yǎng)基在 2~8℃避光保存  

高壓滅菌型的配制  

  1. 將 1 升量的高壓滅菌型干粉在 900ml 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)純凈水中*溶解  
  2. 將溶液 pH 調(diào)至 4.0,并將溶液定溶至 960ml  
  3. 在 121℃、15psi 高壓消毒 5 分鐘  
  4. 將培養(yǎng)基迅速取出,避免過(guò)久加熱引起成份分解或液體蒸發(fā)減少  
  5. 待培養(yǎng)基冷卻至室溫后,無(wú)菌操作加入 29.3ml 的無(wú)菌 7.5%碳酸氫鈉溶液,及 10ml 的無(wú)菌 200mM L-谷氨酰胺  
  6. 如有必要,用無(wú)菌的 1N 鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整 pH  
  7. 將培養(yǎng)基在 2~8℃避光保存  

自備材料  

細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)或注射級(jí)純水  

7.5%碳酸氫鈉溶液(無(wú)菌)  

200mM 谷氨酰胺溶液(無(wú)菌)  

1 N 鹽酸溶液(無(wú)菌)  

1 N 氫氧化鈉溶液(無(wú)菌)  

質(zhì)檢指標(biāo)  

形狀:淡黃色均勻粉末(干粉),澄清透明(液體)  

溶解:干粉按要求溶解后澄清透明  

pH 值:(加碳酸氫鈉前)4.4-5.0(加碳酸氫鈉后)(液體)7.4-8.0  

滲透壓:(加碳酸氫鈉前)230-270(加碳酸氫鈉后)(液體)280-  320  

菌落:每克小于 100cfu (干粉),無(wú)菌(液體)  

細(xì)胞生長(zhǎng):正常(干粉及液體)  

儲(chǔ)存及注意事項(xiàng)  

  1. 所有液體及干粉培養(yǎng)基應(yīng)在 2~8℃避光保存,并在有效期內(nèi)使用。  
  2. 不建議配制培養(yǎng)基濃縮液。部分氨基酸或鹽會(huì)在高濃度下不溶解或沉淀。 
  3. 液體培養(yǎng)基的 pH 儲(chǔ)存時(shí)會(huì)因?yàn)槎趸嫉奶右荻l(fā)生改變。建議盡量減少開(kāi)瓶次數(shù)。  
  4. 滅菌后的液體培養(yǎng)基添加物應(yīng)無(wú)菌,并在無(wú)菌操作下添加。  
  5. 干粉培養(yǎng)基吸濕性強(qiáng),極易吸水變質(zhì)。包裝打開(kāi)后應(yīng)全部使用或剩余舍棄。  

注意:本產(chǎn)品于研發(fā)生產(chǎn)使用

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