多酚氧化酶檢測(cè)試劑盒(PPO)說(shuō)明書(shū)

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：YJS2203                                       規(guī)格：50管/24樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

PPO主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。

PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體，60ml×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體，40ml×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體，10ml×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體，20ml×1瓶，4℃保存

操作步驟：

• 粗酶液提取：   

1、收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μl提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

2、稱取約0.2g組織，加入1ml提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定操作表：

充分混勻，5000g，常溫離心10min，收集上清，用蒸餾水調(diào)零，525nm處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸光度。

注意:每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)置一個(gè)對(duì)照管,可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進(jìn)行1min沸水浴處理

PPO活性計(jì)算：

1、血清、血漿或果汁PPO活性計(jì)算

單位定義：每分鐘每毫升樣品在每毫升反應(yīng)體系中使525nm吸光值變化0.01為一個(gè)酶活力單位

PPO（U/mL）=（A測(cè)定-A對(duì)照）×反應(yīng)總體積÷(V液*×V樣*÷V樣總*) ÷0.01÷反應(yīng)時(shí)間

=80×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷V液*

2、組織中PPO活力的計(jì)算：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每分鐘每mg組織蛋白在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO（U/mg prot）=反應(yīng)總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.01×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷蛋白濃度（mg/ml）=80×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷蛋白濃度（mg/ml）

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每分鐘每g組織蛋白在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO（U/g 鮮重）=反應(yīng)總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.01×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷樣本鮮重（g/ml）=80×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷樣本鮮重（g/ml）

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每分鐘每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每毫升反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。

PPO（U/10⁴ cell）=反應(yīng)總體積（1200μl）÷樣本體積（150μl）÷反應(yīng)時(shí)間（10min）÷0.01×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷細(xì)菌或細(xì)胞密度（10⁴/ml）=80×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷500*

*V液：加入的血清、血漿或果汁的體積

*V樣：加入樣本體積

*V樣總：加入提取液體積

*500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)500萬(wàn)