植物轉(zhuǎn)基因
1 微束激光打孔法 原生質(zhì)體在瞬息間的微束激光映射下,可在質(zhì)膜外表形成平面或物體表面的大小約0.25Pm2左右的孔眼,使DNA分子進(jìn)入了細(xì)胞。
2 電形成空洞法 在瞬息間的高壓直流電電子脈沖的沖擊下,可以使原生質(zhì)膜的分子疏松,形成短時(shí)間之內(nèi)性的直徑為3~4nl-n的孔眼,但對(duì)原生質(zhì)體生存力影響半大。這時(shí),存在于原生質(zhì)體四周?chē)芤褐械耐庠碊NA,就可以經(jīng)過(guò)這種孔眼進(jìn)入了原生質(zhì)體,成功實(shí)現(xiàn)基因的直接轉(zhuǎn)移。
3 微注射法 首先制備植物原生質(zhì)體,游離出細(xì)胞,在倒置目鏡和顯微操作器的幫忙下,將目標(biāo)基因DNA經(jīng)過(guò)微管注射到受體細(xì)胞中。
4 花粉管通道法 在植物受粉時(shí)將含目標(biāo)基因的DNA溶液涂于柱頭上,利用植物在開(kāi)花、受精過(guò)程中形成的花粉管通道,將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞,共進(jìn)一步地整合到受體細(xì)胞的基因組中,隨著受精卵的發(fā)育而變成含轉(zhuǎn)基因的新個(gè)體。該辦法于80時(shí)代開(kāi)始的一段時(shí)間由我國(guó)學(xué)者周光宇提出。我國(guó)到現(xiàn)在為止推廣平面或物體表面的大小zui大的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉就是用花粉管通道法培養(yǎng)出來(lái)的。該法的zui大長(zhǎng)處是不聽(tīng)從賴(lài)團(tuán)體培育人工再生植株,技術(shù)簡(jiǎn)單,不必裝備精致優(yōu)良的培養(yǎng)箱KLYQ,常理育種辦公者便于掌握。
5 基因槍法 又叫作微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏著在細(xì)微的金粒或鎢粒外表,而后在高壓的效用下,微粒被高速射入受體細(xì)胞或團(tuán)體,微粒上的外源DNA進(jìn)入了細(xì)胞后,整合到植物染色體上,得以表現(xiàn),因此成功實(shí)現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)化。
6 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法 將外植體放入包括外源基因的農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtume/ociens)菌液中泡在水中,而后轉(zhuǎn)入共營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),再轉(zhuǎn)入用篩子選營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)引誘抗性愈傷團(tuán)體和抗性芽,扎根后的抗性植株移栽至營(yíng)養(yǎng)缽成長(zhǎng)在放置生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。