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    應(yīng)用酶標(biāo)抗體進(jìn)行免疫測定的方法較多，非均相酶免疫測定是目前應(yīng)用zui廣泛的一類酶免疫檢測技術(shù)，其中以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)zui常用，它可用于測定抗體，也可測定可溶性抗原及細(xì)胞抗原。而酶-抗酶復(fù)合物多用于免疫組織化學(xué)。以下著重介紹ELISA和免疫酶組化技術(shù)。
試劑及配制
1、洗滌液（pH 7.4 PBS)
     KH2PO4              0.2g
     Na2HPO4·12H20      2.9g
     NaCl               8.0g
     KCl                0.2g
     蒸餾水加至         1000ml
2、一抗或配體和酶標(biāo)抗體
操作方法
1、將不同數(shù)量的陽性或陰性細(xì)胞與不同濃度的抗體進(jìn)行反應(yīng)，用以確定zui適細(xì)胞數(shù)和抗體的工作濃度；
2、將細(xì)胞懸液于4℃，1500r/min離心5min，棄上清，重懸于冰冷的洗滌液中，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度；
3、取錐形或圓形凹孔板，加入zui適細(xì)胞數(shù)（1-5´105個(gè)/孔），100ml/孔，4℃，1500r/min離心5min，吸去上清；
4、混合器短時(shí)振搖，使沉淀的細(xì)胞分散；
5、加入一定稀釋度抗體或配體，4℃孵育1.5h，間隔15min輕輕振搖一次；
6、4℃，1500r/min離心5min，吸去上清；用洗滌液洗滌3次，棄上清；
7、加入zui適工作濃度酶標(biāo)抗抗體或酶標(biāo)抗體（抗配體），4℃孵育1.5h，間隔15min輕輕振搖一次；
8、4℃，1500r/min離心5min，吸去上清；用洗滌液洗滌3次，棄上清；
9、加入底物溶液，100ml/孔，避光室溫顯色20-30min，間隔10min輕輕振搖一次；
10、4℃，1500r/min離心5min，轉(zhuǎn)移上清至空孔中，用酶聯(lián)檢測儀測定OD值。