spherotech SPHERO簡介

羥基顆粒用于促進(jìn)免疫分析的發(fā)展，以及蛋白質(zhì)、細(xì)胞或各種目標(biāo)分析物的定量、分離、純化和表征。為了提供羥基的好處，Spherotech提供SPHEROTM羥yi基（HEMA）/聚苯乙烯共聚物磁粉。這些共聚物顆粒提供親水表面，減少固定化蛋白質(zhì)的變性。此外，羥yi基基團(tuán)與水溶液中的一層水形成氫鍵，防止顆粒聚集。這兩個特征轉(zhuǎn)化為更長的配體穩(wěn)定性，更低的非特異性

結(jié)合電位，與表面疏水性更強(qiáng)的顆粒相比，具有更穩(wěn)定的顆粒溶液。盡管羥基不會自發(fā)地與生物分子上的官能團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，但它們可以通過許多已知的反應(yīng)機(jī)制被激活進(jìn)行共價偶聯(lián)。該反應(yīng)導(dǎo)致配體的共價連接，并且可以在水或非水條件下進(jìn)行。通過利用非水條件，可防止活化劑和中間基團(tuán)的水解。為了促進(jìn)與羥yi基表面的共軛，可以使用交聯(lián)劑在粒子和共價偶聯(lián)的配體之間形成間隔臂。各種交聯(lián)劑已成為*的工具

用于制備用于許多免疫分析、蛋白質(zhì)分離和鑒定協(xié)議的包衣珠。常見和有效的交聯(lián)劑是異雙功能交聯(lián)劑，它具有兩個反應(yīng)性基團(tuán)。雜雙功能交聯(lián)劑在分子共軛過程中提供更好的控制和定向，以減少二聚體和聚合物的生成。仔細(xì)選擇配體、固定化化學(xué)和配體密度將有助于產(chǎn)生適合特定應(yīng)用所需生物活性的選擇性和靈敏度。

PMPI或?qū)︸R來酰亞胺苯基異氰酸酯是一端帶有異氰酸酯基團(tuán)，另一端帶有馬來酰亞胺基團(tuán)的異雙功能交聯(lián)劑。因此，它用于促進(jìn)硫化配體與配體的共軛

羥yi基珠表面。傳統(tǒng)上，PMPI用于將硫化蛋白質(zhì)或肽與碳水化合物、類固醇或維生素1交聯(lián)。PMPI對水分非常敏感，需要在非水系統(tǒng)中溶解。信息技術(shù)

不能與緩沖液一起使用，但可溶于甲苯和己烷，也可與二氯甲烷反應(yīng)。

在此，我們提出了一種方法，適用于使用PMPI將巰基化配體交聯(lián)到球形羥yi基（HEMA）/聚苯乙烯共聚物磁粉上。

其他方便的活化方法使用化合物在羥基顆粒上形成活性羰基

如羧基二咪唑（CDI）或碳酸二丁二酰亞胺（DSC）。這些活化劑生成咪唑氨基甲酸酯（CDI）或NHS碳酸鹽（使用DSC），然后它們會自發(fā)地與胺反應(yīng)。在里面

在CDI的情況下，咪唑氨基甲酸酯也會自發(fā)地與巰基發(fā)生反應(yīng)。由于這些活化試劑的任何部分都不會成為共軛分子和羥基珠之間最終鍵的一部分，

它們被認(rèn)為是零長度交聯(lián)劑（2,3）。本文描述了使用CDI和DSC的詳細(xì)耦合協(xié)議。然而，Spherotech建議優(yōu)化質(zhì)量試劑和偶聯(lián)條件，因為兩者都會影響配體與功能化珠表面偶聯(lián)的質(zhì)量

材料：

1.HEMA-300-10（HEMA/聚苯乙烯共聚物磁粉，1%w/v，25-37μm，10 mL）

2.對馬來酰亞胺苯基異氰酸酯（PMPI）

3.磷酸鹽緩沖鹽水，0.1M，pH值7.4（PBS）

4.二甲基亞砜（DMSO）

5.乙腈

6.具有巰基（–SH）反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)的化合物