H2S含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

時(shí)間：2021-5-27閱讀：1461

規(guī)格：100 管/96 樣

微量法

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

H2S是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子，存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，生理濃度的 H2S對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，并對(duì)自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過(guò)程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。

測(cè)定原理：

H2S與醋酸鋅、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán)，亞甲基藍(lán)在665nm 處有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 8mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體 8mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：液體 1.5mL×1 管，4℃避光保存。

樣品處理：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清（漿）：直接測(cè)定。

操作表：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至665nm。

2、操作表

	空白管	測(cè)定管
樣品（μL）		75
H2O（μL）	75
試劑一（μL）	75	75
充分震蕩混勻
試劑二（μL）	75	75
10000g，4℃，離心 10min，去上清，留沉淀
H2O（μL）	150	150

10000g，4℃，離心 10min，去上清，留沉淀
試劑一（μL）	75	75
試劑三（μL）	75	75
充分震蕩混勻
試劑四（μL）	75	75
12000rpm，4℃，離心 10min，取上清
試劑五（μL）	15	15

混勻，25℃靜置20min，于微量石英比色皿/96孔板中，空白管調(diào)零，測(cè)定665nm吸光值，記為 A665。

H2S含量計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=0.0044x，R2=0.9988

（1）組織樣品

a.按照蛋白濃度計(jì)算

H2S（μmol/mg prot）=A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣×Cpr)×10-3 =0.727×A665 ÷Cpr

b.按照樣本重量計(jì)算

H2S（μmol/g）=A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3 = 0.727×A665 ÷W

(3) 細(xì)胞

H2S（μmol/104 cell）=A665÷0.0044×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))）×10 -3

=0.727×A 665 ÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

（2）液體樣品 H2S（μmol/L）=A665÷0.0044×V 反總÷V 樣= 727×A665

V 反總：反應(yīng)總體積，0.24mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.075mL；V 樣總：加入提取液體積，

1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=0.0022x，R2=0.9988

（1）組織樣品

a.按照蛋白濃度計(jì)算

H2S（μmol/mg prot）=A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣×Cpr)×10-3 =1.454 ×A665 ÷Cpr

b.按照樣本重量計(jì)算

H2S（μmol/g）=A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3 = 1.454×A665 ÷W

(3) 細(xì)胞

H2S（μmol/104cell ）=A665÷0.0044×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))）×10-3

=1.454×A665 ÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

（2）液體樣品 H2S（μmol/L）=A665÷0.0044×V 反總÷V 樣= 1454×A665

V 反總：反應(yīng)總體積，0.24mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.075mL；V 樣總：加入提取液體積，

1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

注意事項(xiàng)

z低檢出限為8μmol/L。

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：

免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)	細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)	試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)	實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)	石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡	核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)	免疫共沉淀（CHIRP）實(shí)驗(yàn)
RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀（RIP）實(shí)驗(yàn)代做	酶聯(lián)免疫（ELISA）技術(shù)服務(wù)	雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒	喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒
組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)	染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)	多因子液相芯片技術(shù)（Luminex）實(shí)驗(yàn)	免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)
ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)	蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)	蛋白相互作用分析	堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)	非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn) （Label-free）	DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)	端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定	掃描電鏡服務(wù)	NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)	慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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H2S含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

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