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微生物檢驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)常規(guī)鑒定技術(shù)
2012-6-30 閱讀(2663)
微生物檢驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)常規(guī)鑒定技術(shù)
血清學(xué)反應(yīng)是指：相應(yīng)的抗原與抗體在體外一定條件下作用，可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀、凝集現(xiàn)象。在食品微生物檢驗(yàn)中，常用血清學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒定分離到的細(xì)菌，以zui終確認(rèn)檢測(cè)結(jié)果。
血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)：
1） 抗原體的結(jié)合具有特異性，當(dāng)有共同抗原體存在時(shí)，會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。
2） 抗原體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合，這種結(jié)合雖相當(dāng)穩(wěn)定，但是可逆的。
3） 抗原體的結(jié)合是按一定比例進(jìn)行的，只有比例適當(dāng)時(shí)，才能出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。
4） 血清學(xué)反應(yīng)大體分為兩個(gè)階段進(jìn)行，但其間無(wú)嚴(yán)格界限。*階段為抗原體特異性結(jié)合階段，反應(yīng)速度很快，只需幾秒至幾分鐘反應(yīng)即可完畢，但不出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)現(xiàn)象。第二階段為抗原體反應(yīng)的可見(jiàn)階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)等。反應(yīng)速度慢，需幾分、幾十分以至更長(zhǎng)時(shí)間。而且，在第二階段反應(yīng)中，電解質(zhì)、PH、溫度等環(huán)境因素的變化，都直接影響血清學(xué)反應(yīng)的結(jié)果。
習(xí)慣上將經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)分三種類(lèi)別：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。
1、凝集反應(yīng)
顆粒性抗原（細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，稱(chēng)為凝集反應(yīng)（Agglutination reaction）。其中的抗原稱(chēng)為凝集原，抗體稱(chēng)為凝集素。在該反應(yīng)中，因?yàn)閱挝惑w積抗體量大，做定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)稀釋抗體。
1） 直接凝集反應(yīng)
顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng)，稱(chēng)為直接凝集反應(yīng)（Direct agglution reaction）。
a.玻片凝集法。是一種常規(guī)的定性試驗(yàn)方法。原理是用已知抗體來(lái)檢測(cè)未知抗原。常用于鑒定菌種、血型。如將含有痢疾桿菌抗體的血清與待檢菌液各一滴，在玻片上混勻，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集塊，即陽(yáng)性反應(yīng)，證明該菌是痢疾桿菌。此法快速、簡(jiǎn)便，但不能進(jìn)行定量測(cè)定。
b.試管凝集法。是一種定量試驗(yàn)方法。多用已知抗原來(lái)檢測(cè)血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其含量。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。如肥達(dá)氏反應(yīng)就是診斷傷寒、付傷寒的試管凝集試驗(yàn)。因?yàn)橐獪y(cè)定抗體的含量，故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度，然后加入等量抗原，37℃或56℃上海生化培養(yǎng)箱中2~4小時(shí)觀察，血清zui高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象的，為該抗血清的凝集效價(jià)。
2） 間接凝集反應(yīng)
將可溶性抗原（抗體）先吸附在一種與免疫無(wú)關(guān)的，顆粒狀微球表面，然后與相應(yīng)抗體（抗原）作用，在有電解質(zhì)存在的條件下，即可發(fā)生凝集，稱(chēng)為間接凝集反應(yīng)（Indirect agglutination）。由于載體增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積。當(dāng)載體上有少量抗原與抗體結(jié)合。就出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)，敏感性很高。
2、沉淀反應(yīng)
可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀物，稱(chēng)為沉淀反應(yīng)（Precipitation）。反應(yīng)中的抗原稱(chēng)為沉淀原，抗體為沉淀素。由于在單位體積內(nèi)抗原量大，為了不使抗原過(guò)剩，故應(yīng)稀釋抗原，并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價(jià)。
1） 環(huán)狀沉淀反應(yīng)：是一種定性試驗(yàn)方法，可用已知抗體檢測(cè)未知抗原。將已知抗體注入特制小試管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原與抗體對(duì)應(yīng)，則在兩液界面出現(xiàn)白色的沉淀圓環(huán)。
2） 絮狀沉淀反應(yīng)：將已知抗原與抗體在試管（如凹玻片）內(nèi)混勻，如抗原抗體對(duì)應(yīng)，而又二者比例適當(dāng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的絮狀沉淀，此為陽(yáng)性反應(yīng)。
3） 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：利用可溶性抗原抗體在半固體瓊脂內(nèi)擴(kuò)散，若抗原抗體對(duì)應(yīng)，且二者比例合適，在其擴(kuò)散的某一部分就會(huì)出現(xiàn)白色的沉淀線。上海培養(yǎng)箱每對(duì)抗原抗體可形成一條沉淀線。有幾對(duì)抗原抗體，就可分別形成幾條沉淀線。瓊脂擴(kuò)散可分為單向擴(kuò)散和雙向擴(kuò)散兩種類(lèi)型。單向擴(kuò)散是一種定量試驗(yàn)?？捎糜诿庖叩鞍缀康臏y(cè)定。而雙向擴(kuò)散多用于定性試驗(yàn)。由于方法簡(jiǎn)便易行，常用于測(cè)定分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分。
