先制備McAb-四環(huán)素的偶聯(lián)物:用辛酸一硫酸胺法提取并純化.McAb;取已氧化的Dexteran T1o 600mg與四環(huán)素400mg混溶于10mL的PBS溶液中，加入68mg.McAb,4C攪拌24h,加入200μL NaHB,(1 g/L).4℃攪拌4h,用1 000r/min離心30min。以Sephadex Gzs層析柱分離,旅縮,低溫保存McAb---四環(huán)素偶聯(lián)物。 McAb的活性檢測(cè);按Dowielard法。

將己包被布魯氏菌破碎抗原的聚苯乙烯板4'C過夜，(100pL/孔)加不同稀釋倍數(shù)McAb.室溫反應(yīng)1h,沖洗,加兔抗鼠IgG-HRP結(jié)合物，37C反應(yīng)1h,洗滌后加底物顯色。偶聯(lián)物穩(wěn)定測(cè)定:將偶聯(lián)物6mg溶于6mLPBS溶液中,過濾后置4'C冰箱保存,分別在偶聯(lián)四環(huán)素制劑進(jìn)行抑制布魯氏菌的測(cè)試。

四環(huán)素偶聯(lián)制劑的特異性檢測(cè):分別用測(cè)定劑量單位的各制劑(McAb、四環(huán)素、McAb-四環(huán)素偶聯(lián)物、胰滅活的偶聯(lián)物)對(duì)1000個(gè)沙門氏菌、布魯氏菌、牛I型大腸桿菌進(jìn)行作用,觀察其特異性效果。

McAb-四環(huán)素偶聯(lián)物的分離純化:偶聯(lián)物用.Sephadex G2;分離獲兩種產(chǎn)物,用紫外分光光度計(jì)測(cè)定280nm和440nm波長(zhǎng)的OD值,在280nm處有一個(gè)大的吸收峰,另一峰為無(wú)McAb活性的四環(huán)素吸收峰。

McAb-四環(huán)素偶聯(lián)物的穩(wěn)定性測(cè)定:用保存1~20d的制劑與牛I型布魯氏菌作用2h, 單抗與偶聯(lián)物制劑具有相同的作用,四環(huán)素作用保持1d。

結(jié)果表明,用上述方法將McAb與四環(huán)素偶聯(lián)制備成的偶聯(lián)制劑,不但保留了抗體結(jié)合抗原的活性,而且保留了四環(huán)素的活性。我們利用偶聯(lián)制劑上抗體的這種特性,可以將四環(huán)素特異性的導(dǎo)向布魯氏菌的靶部位,使得該部位的濃度相對(duì)提，地發(fā)揮的作用。

相關(guān)內(nèi)容：

偶聯(lián)抗CD4mAb的載西格列汀聚合物納米粒

透明質(zhì)酸與多肽原性偶聯(lián)物

伊維菌素衍生物和抗阿維菌素類的單克隆抗體

靶向HER3適配體-阿霉素偶聯(lián)物

匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)偶聯(lián)多肽抗原HBx-d382P-KLH

人源化抗ROR1抗體及其AGAP偶聯(lián)物

抗HSV1單克隆抗體-阿糖胞苷偶聯(lián)物

抗-CD19類美登素偶聯(lián)

DMAC-SPDB-磺基      DMAC-SPDB-sulfo

BCN-SS-NHS

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