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技術(shù)文章
士鋒生物蛋白的裂解與提取方法步驟
點擊次數(shù)：883 發(fā)布時間：2013-8-21
這是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol，希望對大家有所幫助。
10ml 三去污裂解液配方如下：
50 mmol/L Tris-cl （pH 8.0）： 0.07882g
150 mmol/L NaCl： 0.08775g
0.2 g/L疊氮鈉： 0.002g
1 g/LSDS 0.01g
100 mg/L Aprotin 0.001g
10 g/L NP-40 0.1g
5 g/L去氧膽酸鈉 0.05g
100 mg/L 苯甲基磺酰氟（PMSF） 0.001g
總蛋白抽提程序：
1.PBS洗細(xì)胞3 次
2.加入裂解緩沖液（1.5x106個細(xì)胞大約加入100µL 裂解液，或100ml細(xì)胞瓶中加入100µL 裂解液），
冰上放置20min
3.收集裂解液
4.離心，12000轉(zhuǎn)，2~10min
5.吸取上清，蛋白定量，分裝，保存在-80度備用