除非另有說明，反相柱應(yīng)始終使用至少 5% 的有機(jī)改性劑。在 95% 到 100% 的水溶液條件下，色譜柱可能會(huì)發(fā)生去濕/相塌陷，這意味著流動(dòng)相會(huì)由于表面張力而從多孔系統(tǒng)中排出。該問題通常發(fā)生在流停止時(shí)。如果色譜柱已去濕，則可以通過泵送 10 到 20 個(gè)柱體積的純甲醇/乙腈或含有至少 50% 有機(jī)改性劑的流動(dòng)相來恢復(fù)它，但不能保證它會(huì)起作用。這種現(xiàn)象在 C18 和 C8 色譜柱中極為常見，其他反相色譜柱也應(yīng)避免這種現(xiàn)象，以確保色譜的穩(wěn)定性。
事實(shí)上，C8 和 C18 鏈形成了一個(gè)非常疏水的層，所以當(dāng)流動(dòng)相的有機(jī)含量低于 5% 時(shí)，它的表面張力會(huì)增加到流動(dòng)相不能再潤濕孔隙內(nèi)部的程度，并且顯然表現(xiàn)為分析物保留的可逆損失。 具有低碳載量（ 反相 HPLC 色譜柱 C6、C4、苯基、PFP 等另一方面）始終能夠耐受較低濃度的有機(jī)物而不會(huì)發(fā)生任何保留偏移。
由于傳統(tǒng)的 C18 HPLC 色譜柱在這些高含水條件下表現(xiàn)不佳，現(xiàn)在市場(chǎng)上有一類新型 RP-AQ 固定相，在這些惡劣條件下表現(xiàn)出不變的性能。它們的多功能性證明它們是常規(guī) HPLC 分析以及 100% 水溶液條件下極性樣品分析的理想選擇。
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