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恭喜你~在做分子克隆之前看到了這篇福利好文!

2021-9-3  閱讀(420)

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恭喜你~在做分子克隆之前看到了這篇福利好文!


分子克隆技術(shù)發(fā)展至今,從經(jīng)典的酶切酶連法到簡(jiǎn)便、快速的同源重組法,同源重組技術(shù)廣受科研小伙伴的青睞!翌圣一步法快速克隆試劑盒(Cat#10911、10912)自上市以來(lái),受到了眾多小伙伴的支持!好評(píng)如潮!看到各位小伙伴的反饋結(jié)果,小翌按捺不住內(nèi)心的喜悅,要與大家一同分享~




一步法快速克隆試劑盒




翌圣一步法快速克隆試劑盒是一種利用同源重組的原理,進(jìn)行無(wú)縫克隆的技術(shù)。該技術(shù)無(wú)需考慮酶切位點(diǎn),將PCR產(chǎn)物定向克隆至任何載體的任何位點(diǎn),可高效克隆50 bp-10 kb片段。操作過(guò)程簡(jiǎn)單快速,只需50°C20 min即可完成反應(yīng)。勁爆的是,多個(gè)片段也可以同時(shí)克隆哦!


數(shù)據(jù)展示


01

北京大學(xué)

再也不用擔(dān)心片段太小,載體過(guò)大連不上的問(wèn)題了

克隆方案:克隆SfGFP1-9基因(588 bp)到載體pBOBI-N-flag(9000 bp)上,檢測(cè)其表達(dá)。

使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進(jìn)行克隆,陽(yáng)性率100%。.jpg

圖1. 使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進(jìn)行克隆,陽(yáng)性率100%。
A:陰性對(duì)照轉(zhuǎn)化平板。B:重組轉(zhuǎn)化平板。C:線性化載體檢測(cè)電泳圖。D:目的片段檢測(cè)電泳圖。E:克隆測(cè)序?qū)Ρ葓D。

02

南京農(nóng)業(yè)大學(xué)

1kb載體連接,克隆數(shù)與陽(yáng)性率都很高

克隆方案:將目的片段Gmclc1(2352 bp)與表達(dá)載體pCAMBIA1300(10217 bp)連接,構(gòu)建重組載體。
22.jpg圖2. 使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進(jìn)行克隆,克隆成功,克隆陽(yáng)性率為100%。
A:陰性對(duì)照轉(zhuǎn)化平板。B:重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化平板。C:1和2分別為原始載體和線性化載體檢測(cè)電泳圖。D:目的片段檢測(cè)電泳圖。E:菌落PCR鑒定電泳圖。F:重組質(zhì)粒的酶切鑒定電泳圖。

03

微生物所

輕輕松松5片段連接

克隆方案:克隆外源基因Pcch(576+867+915+647 bp)pBR322質(zhì)粒(3996 bp)上,用以表達(dá)Pcch蛋白。
33.jpg圖3. 使用Hieff Clone® Multi One Step Cloning Kit(Cat#10912)進(jìn)行克隆,5個(gè)片段(總長(zhǎng)度7007 bp)一次連接成功。
A:重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化平板。B:載體酶切后電泳圖。C:菌落PCR驗(yàn)證結(jié)果;1為原始質(zhì)粒,2-5為重組質(zhì)粒,僅檢測(cè)863 bp的一個(gè)目的片段,6為假陽(yáng)性。D:陽(yáng)性克隆測(cè)序結(jié)果。


04

仁濟(jì)醫(yī)院

總長(zhǎng)度1kb以上,一次成功

克隆方案:克隆Setd2基因(7500 bp)pCDH載體(8000 bp)。
44.jpg圖4. 使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進(jìn)行克隆,克隆成功。
A:陰性對(duì)照轉(zhuǎn)化平板。B:重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化平板。C:載體和目的片段檢測(cè)電泳圖。D:菌落PCR鑒定電泳圖。


部分發(fā)表文獻(xiàn)


1. Jiang, Y., et al., Plants transfer lipids to sustain colonization by mutualistic mycorrhizal and parasitic fungi[J]. Science, 2017. (IF37.205)

2. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019. (IF31.398)

3. Xing, Y.H., et al., SLERT Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription[J]. Cell, 2017. 169(4): p. 664-678.e16. (IF31.398)

4. Wang Y, Hu SB, et al. Genome-wide screening of NEAT1 regulators reveals cross-regulation between paraspeckles and mitochondria[J]. Nat Cell Biol. 2018 Oct;20(10):1145-1158. (IF 20.46)

5. Li X., et al., Coordinated circRNA Biogenesis and Function with NF90/NF110 in Viral Infection[J]. Mol Cell. 2017 Jul 20;67(2):214-227.e7. (IF14.548)

6. Yao R W, Xu G, Wang Y, et al. Nascent Pre-rRNA Sorting via Phase Separation Drives the Assembly of Dense Fibrillar Components in the Human Nucleolus[J]. Molecular cell, 2019. (IF14.548)

7. Wu P, Zhang T, Liu B, et al. Mechano-regulation of peptide-MHC class I conformations determines TCR antigen recognition[J]. Molecular cell, 2019, 73(5): 1015-1027. e7. (IF14.548)

8. Qiao HH, Wang F, et al. An ef?cient and multiple target transgenic RNAi technique with low toxicity in Drosophila[J]. Nat Commun. 2018 Oct 8;9(1):4160. (IF 12.353)



效果大家都看到了,那么我們?cè)賮?lái)看下為什么同源重組法廣受大家歡迎呢?
與傳統(tǒng)的酶切酶連法相比(圖4),一步法克隆技術(shù)足足少了2個(gè)步驟(片段酶切+產(chǎn)物純化),這2步最少也要30分鐘,省下的時(shí)間去運(yùn)動(dòng)一下,比如打個(gè)羽毛球~跑個(gè)步~科研之余,強(qiáng)身健體,擁有一個(gè)更健康的體魄、一張更陽(yáng)光的臉龐~還有一段開(kāi)掛的人生~

123.jpg 
圖5. 分子克?。ㄝd體構(gòu)建)流程對(duì)比圖


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名稱

貨號(hào)

規(guī)格

Hieff Clone®  Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆試劑盒

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Hieff Clone®  Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆試劑盒

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好啦!看完本期分享的內(nèi)容,你是不是也心動(dòng)啦~心動(dòng)就行動(dòng)起來(lái)吧!小翌帶你邊做實(shí)驗(yàn)邊擼福利~

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