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在使用傳統(tǒng)高保真酶進(jìn)行PCR時(shí)，難免會(huì)遇到一些棘手的問題。例如保真度不夠，擴(kuò)增得到的片段測(cè)序后發(fā)現(xiàn)仍有目的堿基發(fā)生突變或缺失。擴(kuò)增的時(shí)間也相對(duì)漫長(zhǎng)，有時(shí)擴(kuò)增5kb的片段也要花費(fèi)將近2個(gè)小時(shí)的時(shí)間?，F(xiàn)小翌推出一款快速高保真PCR以解決您的煩惱！
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) 預(yù)混液中含有預(yù)先添加的電泳指示劑，PCR產(chǎn)物可直接進(jìn)行電泳，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。該產(chǎn)品具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)體系中只需加入引物和模板即可。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護(hù)劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)
超高保真：低錯(cuò)配率，高GC易突變序列中堿基錯(cuò)配比231/300000；
擴(kuò)增速度快：延伸速度快至5 sec/kb；
適用性廣：可覆蓋20-80%GC含量的基因，耐受小鼠裂解物和20%的血液；
穩(wěn)定性好：37℃下存放7d，不影響產(chǎn)品性能；
快速簡(jiǎn)便：只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，帶有上樣染料，可直接電泳；
以不同物種基因組為模板，選取6段GC rich、極易發(fā)生堿基突變/丟失的片段進(jìn)行擴(kuò)增，將各自PCR產(chǎn)物克隆至載體，并對(duì)每種序列挑取100個(gè)單克隆進(jìn)行測(cè)序以確認(rèn)堿基序列錯(cuò)配/突變情況。結(jié)果顯示10164ES發(fā)生堿基錯(cuò)配/突變的比例優(yōu)于國(guó)內(nèi)外品牌試劑。
使用10164ES和T產(chǎn)品均以5 sec/kb的延伸速度從100 ng人基因組模板擴(kuò)增不同長(zhǎng)度片段（0.4-10 kb），延伸時(shí)間均要求為5 sec/kb。結(jié)果顯示，10164ES在10kb以內(nèi)的片段均可以5 sec/kb的延伸速度擴(kuò)增。Marker: Yeasen 10510ES。
使用10164ES從人gDNA模板中擴(kuò)增23-76% GC含量片段，延伸時(shí)間設(shè)置5 sec/kb。結(jié)果顯示，產(chǎn)品擴(kuò)增特異性良好，能兼容不同GC含量片段擴(kuò)增。Marker: Yeasen 10510ES。
使用10164ES從不同樣本中擴(kuò)增不同長(zhǎng)度片段，延伸時(shí)間設(shè)置5-10 sec/kb。結(jié)果顯示本產(chǎn)品擴(kuò)增特異性良好，能兼容不同模板的不同片段擴(kuò)增。
注：1.小鼠gDNA 1 kb；2.小鼠gDNA 2 kb；3.小鼠gDNA 6 kb；4.玉米gDNA 1 kb；5.水稻gDNA 2 kb-A；6.水稻gDNA 2 kb-B；7.人293細(xì)胞cDNA 1 kb；8.人293細(xì)胞cDNA 2 kb ；9.人293細(xì)胞cDNA 3 kb；10.人293細(xì)胞cDNA 12 kb；11.大腸桿菌菌液8 kb；12.大腸桿菌菌液16 kb；13.水稻gDNA 10 kb-A；14.水稻gDNA 10 kb-B；15.水稻gDNA 10 kb-C；16.水稻gDNA 20 kb-A；17.水稻gDNA 20 kb-B；18.人血液直擴(kuò)3 kb。Marker: Yeasen 10510ES
用10164ES分別對(duì)擬南芥、油菜、馬鈴薯0.5-10 kb 不同GC含量的片段進(jìn)行擴(kuò)增，延伸時(shí)間5 sec/kb，結(jié)果顯示10164ES可保證擴(kuò)增。Marker: Yeasen 10510ES。
用10164ES分別對(duì)擬南芥、油菜、果蠅、秀麗線蟲和斑馬魚中隨機(jī)序列(序列隨機(jī)拉取)，0.5-10kb覆蓋20-80%GC含量的片段進(jìn)行擴(kuò)增，延伸時(shí)間5 sec/kb，結(jié)果顯示10164ES檢出率高。
使用37℃熱加速放置3 d和7 d的10164ES分別擴(kuò)增100 ng人基因組中3 kb和5 kb的DNA片段，延伸時(shí)間設(shè)置5 sec/kb。結(jié)果顯示產(chǎn)品具有不錯(cuò)的穩(wěn)定性。Marker: Yeasen 10510ES。
客戶評(píng)價(jià)：PCR過程速度快，條帶合適，可在瓊脂糖電泳中直接上樣。進(jìn)口N品牌的條帶偏上，可能是自身的buffer影響，且未添加loading buffer，該產(chǎn)品可替代目前我的實(shí)驗(yàn)方案中的高保真酶。
客戶評(píng)價(jià)：與進(jìn)口T品牌相比，克隆條帶更加清晰單一，整個(gè)PCR時(shí)間也更快，跑膠時(shí)不用再額外加染料，非常方便快捷。
客戶評(píng)價(jià)：與國(guó)產(chǎn)V品牌相比，效果相當(dāng)，個(gè)人感覺更佳。
客戶評(píng)價(jià)：效果很好，條帶清楚。
10163ES01-無電泳指示劑
10164ES-含電泳指示劑
產(chǎn)品定位 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
5s/kb，保真保快(無上樣染料) | 2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix | 10163ES03 | 1 mL |
5s/kb，保真?？?含上樣染料) | 2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) | 10164ES03 | 1 mL |
平末端拓?fù)淇寺?/span> | Hieff Clone® Zero TOPO-Blunt Cloning Kit | 10909ES20 | 20 T |
平末端拓?fù)淇寺。缓嗫寺∥稽c(diǎn) | Hieff Clone® Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit | 10910ES20 | 20 T |
單片段同源重組克隆 | Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit | 10911ES20/50 | 20/50 T |
單多片段通用同源重組 | Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit | 10922ES20/50 | 20/50 T |
常規(guī)克隆感受態(tài) | 10 Chemically Competent Cell | 11801ES80 | 10×100μL |
常規(guī)克隆感受態(tài) | DH5α Chemically Competent Cell | 11802ES80 | 10×100 μL |
快速克隆感受態(tài) | DH5α Fast Chemically Competent Cell | 11803ES80 | 10×100 μL |
常規(guī)克隆感受態(tài) | BL21(DE3) Chemically Competent Cell | 11804ES80 | 10×100 μL |
快速PCR | 2×Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix(with Dye) | 10157ES03/08 | 1/5×1 mL |
常規(guī)條帶分離 | Agarose瓊脂糖 | 10208ES60 | 100 g |
