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DNA聚合酶是PCR反應(yīng)的核心組分，廣泛應(yīng)用于生物及醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域。對于普通PCR，常規(guī)熱穩(wěn)定DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）即可滿足需求。但對于高通量測序，擴增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性非常關(guān)鍵，優(yōu)選高保真酶進行擴增。常規(guī)的高保真擴增酶無法讀取和擴增含有尿嘧啶和次黃嘌呤的模板，翌圣生物通過定向改造，推出Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase，該聚合酶可兼容含U堿基模板和常規(guī)模板，擴增效率高保真性好，而且酶本身各項殘留均很低，滿足多種應(yīng)用方向的擴增需求。
哪些應(yīng)用方向可優(yōu)選Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase呢？
重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化/酶法轉(zhuǎn)化的DNA擴增-甲基化研究；
受損FFPE DNA樣本的擴增-腫瘤領(lǐng)域；
防止擴增子的氣溶膠污染-病原領(lǐng)域；
基于尿嘧啶切除的克隆-分子克隆。
圖1.Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的應(yīng)用方向
<點擊查看大圖>
以上這些應(yīng)用展示了Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在分子生物學(xué)研究中的多功能性和高效性，使其成為實驗室中的工具之一。
下面重點介紹Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在多重PCR擴增體系里的表現(xiàn)：
多重PCR (Multiplex polymerase chain reaction，MPCR) 是指通過一次PCR反應(yīng)同時對多個靶標(biāo)進行擴增，結(jié)合一定的檢測手段對擴增產(chǎn)物進行檢測從而實現(xiàn)對多個靶標(biāo)進行診斷的技術(shù)。MPCR具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究。
多重PCR微生物多樣性檢測的應(yīng)用非常廣泛，尤其是原核生物16S的多重PCR擴增測序。16S擴增子測序是指利用合適的通用引物擴增環(huán)境中微生物的16S rDNA/18S rDNA /ITS高變區(qū)或功能基因，通過高通量測序技術(shù)檢測PCR產(chǎn)物的序列變異和豐度信息，分析該環(huán)境下的微生物群落的多樣性和分布規(guī)律，以揭示環(huán)境樣品中微生物的種類、相對豐度、進化關(guān)系等。16S擴增子測序的技術(shù)路線如下：
圖2. 16S擴增子測序的技術(shù)路線
性能展示
實驗條件
樣本：土壤DNA 10 ng
一輪PCR：25μL體系，擴增28個循環(huán)，MGI平臺16S引物（16S-V3-V4,16S-V4），擴增酶2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix（13283ES）
二輪PCR：25μL體系，第一輪產(chǎn)物投入量50 ng，擴增6個循環(huán)，擴增酶包含Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase及另外兩種高保真擴增酶，0.9x純化，50μL洗脫
實驗結(jié)果
實驗結(jié)論
引物16S-V3-V4擴增的文庫主峰在600bp左右，引物16S-V4擴增的文庫主峰在500bp左右，擴增條帶與理論文庫條帶吻合；
第二輪PCR擴增時，在兩種擴增引物體系下12928相對擴增酶A和擴增酶B的擴增能力強，文庫產(chǎn)量最高。
產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品應(yīng)用 |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix Hieff Canace®耐U+高保真DNA聚合酶混合液 | 12928ES | 耐U高保真擴增 |
熱敏UDG含甘油Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG),heat-labile,1 U/μL | 10303ES | PCR防污染 |
Uracil-Specific Excision Reagent (1 U/μL) | 14537ES | 基于尿嘧啶切除的克隆 |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix | 13283ES | 多重PCR擴增 |
