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如何定量低豐度目的基因的表達(dá)（含詳細(xì)解決方法）
有時(shí)候，qPCR實(shí)驗(yàn)會(huì)成為阻礙你課題順利開展的強(qiáng)勢(shì)攔路虎！看似簡(jiǎn)單的基因表達(dá)量差異驗(yàn)證，當(dāng)遇到低豐富表達(dá)的基因時(shí)，也許就舉步維艱。模板獲取困難導(dǎo)致的RNA提取量少或RNA質(zhì)量不佳，即使選用蕞佳的試劑、篩選出良好的引物，也有可能qPCR定量得到的內(nèi)參基因CT值在18-20個(gè)cycle，而目的基因在31-35個(gè)循環(huán)。遇到這種情況，你是怎么解決的呢？qPCR在低豐度表達(dá)基因定量中的局限性基因的豐度是指基因在基因組中的拷貝數(shù)?？煞譃楦哓S度，中等豐度和低豐度。低豐度是指目的基因在基因組中的拷貝數(shù)低,可簡(jiǎn)單 -
掌握這幾個(gè)影響因素，你的反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)就了
小翊君前幾期一直在和大家聊qPCR，今天我們開啟一個(gè)新的話題，聊一聊反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）定義:反轉(zhuǎn)錄過(guò)程簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)是以RNA為模板合成DNA的過(guò)程，是對(duì)中心法則的重要修正和補(bǔ)充。中心法則通常會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)不同的表述，逆轉(zhuǎn)錄和反轉(zhuǎn)錄，二者的本質(zhì)區(qū)別在于：反轉(zhuǎn)錄是在研究過(guò)程中人為提取RNA并以之為模板人工合成DNA的過(guò)程。逆轉(zhuǎn)錄是RNA病毒自主行為，以RNA為模板形成DNA的過(guò)程。前者發(fā)生在體外，后者發(fā)生在體內(nèi)。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的示意圖如下圖所示：反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程看似簡(jiǎn)單的反 -
牛血清白蛋白、免疫球蛋白G（IgG）、牛凝血酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、封閉血清和低密度脂蛋白YEASEN（翊圣生物）致力于為診斷試劑公司和廣大科研用戶提供高品質(zhì)的牛血清白蛋白、免疫球蛋白G（IgG）、牛凝血酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、封閉血清和低密度脂蛋白，系列產(chǎn)品如下：（一）牛血清白蛋白（BSA）牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）是牛血清中的一種球蛋白，又稱第五組分（需要注意的是，第五組分并不是BSA的一種組份，而是EdwinJ.Cohn教授早期從血液中通過(guò)特定的分離技術(shù)得到5
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qPCR進(jìn)階攻略——帶你玩轉(zhuǎn)儀器設(shè)置！
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)是分子實(shí)驗(yàn)室常用的一項(xiàng)技術(shù)。持續(xù)關(guān)注小翊的應(yīng)該都掌握了高質(zhì)量cDNA的獲取方法，引物設(shè)計(jì)指南以及反應(yīng)體系的配制技巧（還未get的小伙伴戳文末鏈接），然而上機(jī)時(shí)，發(fā)現(xiàn)和別人的反應(yīng)條件不一致卻又不敢動(dòng)儀器？本期小翊將帶你玩轉(zhuǎn)qPCR儀器的設(shè)置！目前市面上的qPCR儀器種類五花八門，但基本上儀器的設(shè)置都相對(duì)一致。我們以ABI7500為例進(jìn)行介紹。反應(yīng)板設(shè)置實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇：我們將實(shí)驗(yàn)命名為“Yeasen”，進(jìn)行“Quantitation：ΔΔCt”實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方法選擇：如選用SYBRGre -
逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)做不好，是不是引物出了問(wèn)題？
實(shí)驗(yàn)室常用到的實(shí)驗(yàn)：逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)體外模擬病毒復(fù)制過(guò)程，以提取的RNA為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄酶催化，合成出與RNA互補(bǔ)的cDNA鏈。終構(gòu)建cDNA文庫(kù)，并從中篩選所需的靶標(biāo)基因。BUT！小伙伴們做逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)時(shí)，1）有沒(méi)有深究過(guò)RNA逆轉(zhuǎn)錄出的cDNA能不能真實(shí)反映出基因表達(dá)信息？2）做實(shí)驗(yàn)時(shí)，有沒(méi)有發(fā)生過(guò)內(nèi)參做的很好，目的基因做不出的情況？如果有發(fā)生上述情況，那么需要重新評(píng)估逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性。逆轉(zhuǎn)錄結(jié)果有效性的評(píng)定逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性的評(píng)定重要的是盡可能反映樣本中原始RNA模板的信息， -
測(cè)序數(shù)據(jù)不好？是不是建庫(kù)出了問(wèn)題？！
HB190313測(cè)序數(shù)據(jù)不好？是不是建庫(kù)出了問(wèn)題？！——從測(cè)序數(shù)據(jù)看文庫(kù)構(gòu)建高通量測(cè)序中的文庫(kù)構(gòu)建指的是在DNA兩端連接特定的接頭從而使其符合測(cè)序平臺(tái)要求的過(guò)程，在高通量測(cè)序過(guò)程中，文庫(kù)質(zhì)量直接影響終測(cè)序數(shù)據(jù)的質(zhì)量，打個(gè)比方，如果文庫(kù)上機(jī)測(cè)序的濃度很低，樣本在FlowCell上擴(kuò)增所形成的DNA樣本簇就會(huì)很少，測(cè)序數(shù)據(jù)量也將減少，這就可能導(dǎo)致測(cè)序失敗，所以我們說(shuō)文庫(kù)的質(zhì)量控制和質(zhì)量評(píng)估也是NGS中的關(guān)鍵步驟。文庫(kù)如何質(zhì)控？評(píng)估文庫(kù)質(zhì)量的方法有哪些？n文庫(kù)質(zhì)控：文庫(kù)在上機(jī)之前都有會(huì)進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，質(zhì) -
這有一份FFPE樣本建庫(kù)的檔案，還不趕緊Pick?什么是FFPE？FFPE（Formalin-FixedａndParrffinEmbedded），即福爾馬林固定石蠟包埋樣本。由于這種處理方法能夠較長(zhǎng)時(shí)間地保存組織或制備檢驗(yàn)所需的組織標(biāo)本，所以在臨床病理檢驗(yàn)、腫瘤基因檢測(cè)中應(yīng)用廣泛。在世界范圍內(nèi)，大約有數(shù)十億份組織樣品保存在醫(yī)院或者組織樣品庫(kù)中，其中絕大多數(shù)是使用福爾馬林固定石蠟包埋的方法處理的樣品。FFPE樣本通常代表了珍貴且來(lái)源廣泛的生物醫(yī)學(xué)研究材料，為闡明疾病機(jī)制、回顧性研究等提供了寶貴的資
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系統(tǒng)介紹鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病疾病模型
翊圣生物提供高成功率糖尿病建模用STZ：純度≥98%（HPLC測(cè)定）。產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格*（元）Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES60100mg156.00Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES76500mg386.00Streptozocin鏈脲佐菌素60256ES801g676.00文章包含以下知識(shí)點(diǎn)1.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)SOP2.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型建模效果評(píng)估指標(biāo)3.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的失敗原因解析4.STZ誘導(dǎo)小/大鼠死亡率高的原因解析5.糖尿病建模
