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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

線粒體是絕大多數(shù)真核細(xì)胞內(nèi)的一種基本的重要的細(xì)胞器，是細(xì)胞的動(dòng)力工廠，細(xì)胞進(jìn)行氧化磷酸化的場(chǎng)所。因此，對(duì)線粒體進(jìn)行分離，以此為對(duì)象，對(duì)線粒體呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他線粒體蛋白性能分析等具有重要意義。

本試劑盒可用于快速便捷分離組織/細(xì)胞線粒體，獲得的線粒體純度較高，且絕大部分都含有完整的內(nèi)膜和外膜，可用于線粒體的生理功能等方面的研究，得到的線粒體也可被相應(yīng)裂解液裂解得到線粒體蛋白，從而用于后續(xù)SDS-PAGE、Western、雙向電泳及免疫共沉淀等分析。

按照每個(gè)樣品使用量（細(xì)胞1-5 × 10⁷個(gè)；組織：100-200 mg），20128ES50/20128ES60可分別進(jìn)行50個(gè)和100個(gè)樣品的抽提。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期1年。

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1 線粒體的抽提

1）樣本處理

① 組織勻漿：稱取100-200 mg新鮮組織，PBS或生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干，用剪刀剪成非常小的碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1-2.5mL冰預(yù)冷的試劑A，混勻，孵育8-10min，勻漿10-30下左右，也可采用超聲方法破膜。

② 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 g 離心5-10 min收集細(xì)胞。計(jì)數(shù)，每次提取需要1-5 × 10⁷個(gè)細(xì)胞，加入1-2.5mL預(yù)冷的試劑A，重懸細(xì)胞，混勻，孵育8-10min，可以采用超聲或勻漿器方法破膜。

2）將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4 oC，800 g 離心5 min。

【注】：細(xì)胞核、大的膜碎片、未裂解細(xì)胞等沉淀在管底。

3）收集上清液并轉(zhuǎn)移到新的離心管。4 oC，800 g 再次離心5 min。棄沉淀。

4）將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管。4 oC，12,000 × g 離心10 min，小心去除上清，沉淀即為分離得到的細(xì)胞線粒體。

【注】：離心后的上清含胞漿成分，盡量除去上清。

2 線粒體蛋白的抽提

1）向每毫升預(yù)冷試劑B加入10μL試劑C混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2）按每10μL線粒體壓積中，加入100μL上述配制好的試劑B/C溶液。

3）置于4℃旋渦振蕩15-30 min 。

4）10,000rpm，4℃離心15min，取上清，即為線粒體全蛋白提取物，進(jìn)行蛋白定量。

5）分裝保存于-70℃，避免反復(fù)凍融。

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