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上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司>>技術(shù)文章>>抗體結(jié)構(gòu)分析太復(fù)雜?FabRICATOR幫你實現(xiàn)定點酶切!

抗體結(jié)構(gòu)分析太復(fù)雜?FabRICATOR幫你實現(xiàn)定點酶切!

閱讀:707        發(fā)布時間:2023-1-17

對于抗體結(jié)構(gòu)的質(zhì)量定量,完整的結(jié)構(gòu)解析包括整體結(jié)構(gòu)分析、亞基水平分析和肽圖。其中亞基水平分析在抗體藥物結(jié)構(gòu)分析中對設(shè)備要求低,分析時間短,且做為QC認證的試驗方法,有助于在研發(fā)前期理解抗體結(jié)構(gòu)。

Genovis抗體酶切產(chǎn)品可以在亞基水平幫助我們分析抗體片段的結(jié)構(gòu),獲得均勻的Fab和Fc片段。而目前應(yīng)用較為廣泛的胰蛋白酶(Trypsin)、木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶(pepsin)切割位點并不專一,特異性差,酶切結(jié)果隨時間的變化容易造成抗體未被切開或過度消化的結(jié)果。因此,Genovis可以幫助您更簡單高效的完成抗體結(jié)構(gòu)分析。

 

1.    FabRICATOR

 

FabRICATOR (IdeS)廣泛用于表征、質(zhì)量控制、穩(wěn)定性測試、生產(chǎn)監(jiān)測和基于抗體的治療方法(如單克隆抗體、ADC、生物類似藥和Fc -融合蛋白)的克隆選擇。該酶可在鉸鏈下方的單個氨基酸位點消化抗體,生成同質(zhì)F(ab')2和Fc片段。FabRICATOR可以用于消化人IgG1-4,猴、鼠、兔、羊的IgG。 

圖1  FabRICATOR酶切原理圖


 
圖2  FabRICATOR酶切確定抗體質(zhì)量屬性結(jié)果

 

凍干酶外,該酶還可以提供多種產(chǎn)品形式可滿足不同的試驗需求,幫助您更好的完成試驗。

 

① FragIT™ 

 

FragIT旋轉(zhuǎn)柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的FabRICATOR (IdeS)酶,用于生成F(ab')2和Fc/2片段,而不會對最終的制備產(chǎn)生酶污染。

 

② FragIT™ Kit

 

適用于需要快速方便地消化抗體的應(yīng)用,或制備無殘留酶的Fc融合蛋白,F(xiàn)ragIT小柱裝填有固定在瓊脂糖珠上的FabRICATOR。使用FragIT試劑盒,均勻的F(ab')2和Fc片段也可以使用CaptureSelect™親和純化柱進行分離。 

圖3  FragIT™ Kit工作原理圖

 

③ FabRICATOR®-HPLC

 

FabRICATOR-HPLC是一種快速柱上消化單克隆抗體的高效液相色譜柱,它將FabRICATOR酶固定在與HPLC兼容的樹脂上,用于穩(wěn)定的,可重復(fù)性的柱上抗體消化。FabRICATOR-HPLC色譜柱可以用于標(biāo)準(zhǔn)的LC-MS常規(guī)分析;也可以是更*配置,例如2D-LC配置;*是將生物反應(yīng)器與MS連接為一個系統(tǒng),該系統(tǒng)可以自動化在線進行柱上消化,抗體亞基分析,這將大大減少操作人員時間、樣品處理誤差,并增加樣品通量。

圖4 FabRICATOR®-HPLC工作原理圖

 

④ FabRICATOR® MagIC

 

FabRICATOR® MagIC 可以用于抗體的自動化平臺,如Thermo Scientific™KingFisher™Duo Prime凈化系統(tǒng),或者振動臺。適用于手動或自動的基于IgG的生物制劑的常規(guī)分析。FabRICATOR MagIC 包含固定在磁性瓊脂糖珠上的FabRICATOR酶,支持并行樣品制備和多種抗體亞基的分析。

圖5  FabRICATOR® MagIC工作原理圖

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號
FabRICATOR, 2000 unitsA0-FR1-020
FabRICATOR, 96×100 unitsA0-FR1-096
FabRICATOR LE (low endotoxin), 2000 unitsA0-FR8-020
FragIT, Microspin 2×0.5 mgA0-FR6-010
FragIT kit, Microspin 0.5 mgA2-FR2-005
FabRICATOR-HPLCA0-FRC-050
FabRICATOR MagIC, 2 mlA0-FRM-024


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2.FabALACTICA®   

 

FabALACTICA (IgdE)促進了雙特異性和多特異性抗體的表征和完整的Fc糖基化分析。它還簡化了單價結(jié)合、高階結(jié)構(gòu)、二硫鍵和鉸鏈區(qū)突變抗體的研究。該酶在鉸鏈上方的特定位點消化人IgG1,產(chǎn)生完整和均勻的Fab和Fc片段。
 
圖6  FabALACTICA®酶切原理圖

 

產(chǎn)品貨號
FabALACTICA, 2000 unitsA0-AG1-020
Immobilized FabALACTICA, Microspin 2×0.5 mgA0-AG6-010
FabALACTICA Fab kit, Microspin 0.5 mgA2-AFK-005


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3.FabDELLO™   

 

FabDELLO對鉸鏈區(qū)突變的抗體(如LALA突變)具有活性,并使中級LC-MS分析能夠?qū)︺q鏈區(qū)突變抗體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性進行表征。能夠特異性地在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1,在不需要還原條件的情況下,在兩小時內(nèi)生成完整的Fab和Fc片段。


 
圖7 FabDELLO™酶切原理圖

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號
FabDELLO, 8 × 100 unitsB1-BD1-008


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4.FabRICATOR®Z  鉸鏈下方  

 

FabRICATOR®Z (IdeZ)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在鉸鏈下方的特定位點消化小鼠IgG2a和IgG3,在兩小時的孵化后產(chǎn)生生成F(ab')2和Fc片段。
 
圖8 FabRICATOR®Z酶切原理圖
相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號
FabRICATOR Z, 2000 unitsA0-FRZ-020
FragIT Z, Microspin 2×0.5 mgA0-FZ6-010
FragIT Z kit, Microspin 0.5 mgA2-FZ2-005


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5.FabULOUS ™

FabULOUS (SpeB)可用于制備的Fab片段可用于親和性研究、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。
它可以在鉸鏈上方的特定位點消化人IgG和小鼠、大鼠、山羊、綿羊和兔子的IgG,產(chǎn)生均勻的Fab片段。


 
圖9 FabULOUS ™酶切原理圖

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號
FabULOUS, 2000 unitsA0-PU1-020
FabULOUS Fab kit, mouseA1-PFK-020

 


5.GingisKHAN®   

 

GingisKHAN (Kgp)用于用LC-MS表征基于抗體的生物治療,研究Fc聚糖分析,雙特異性抗體,affinity和avidity效應(yīng),并識別翻譯后修飾。在鉸鏈上方的特定位點消化人IgG1,產(chǎn)生完整和均勻的Fab和Fc片段。


 
圖10 GingisKHAN®酶切原理圖

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號
GingisKHAN, 2000 unitsB0-GKH-020
GingisKHAN Fab kitB0-GFK-020

 

6.GlySERIAS™   

 

GlySERIAS是一種特別的酶,可消化富含甘氨酸的融合蛋白連接物,如Gly4Ser和Glyx Sery(GS)以及多甘氨酸(G)連接物。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個結(jié)構(gòu)域,以促進特征分析。融合蛋白的亞基水平分析既能降低整個樣品的復(fù)雜性,又能使結(jié)構(gòu)域具體化。并允許特定領(lǐng)域的識別和翻譯后修飾的監(jiān)測。


 
圖11 GlySERIAS™酶切原理圖

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號
GlySERIAS, 2000 unitsA0-GS1-020


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