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血細胞計數(shù)板的實驗原理及注意事項
閱讀：7502發(fā)布時間：2022-2-15
實驗原理
在細胞培養(yǎng)工作中，常需要了解細胞生活狀態(tài)和鑒別細胞是否存活，確定細胞接種濃度和數(shù)量以及了解細胞活力和增殖狀況，如胰酶消化制備的細胞懸液中細胞存活率確定，凍存細胞復蘇后的活力檢測等。
存活測試的原理為染料排除實驗，利用染料會滲入死細胞中而呈色，因活細胞細胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。一般使用臺盼藍染料，如果細胞不易吸收臺盼藍，則用赤蘚紅B。計算細胞活率：活細胞數(shù)/（活細胞數(shù)+死細胞數(shù)）×100%。計數(shù)應在臺盼藍染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成，隨時間延長，部分活細胞也開始攝取染料；因為臺盼藍與蛋白質有很強的親和力，用不含血清的稀釋液，可以使染色計數(shù)更為準確。
注意事項
滴細胞懸液時要干凈利落，加量要適當，過多易使蓋片漂移，或淹過蓋片也會失敗，應重做；過少易出現(xiàn)氣泡；不理想時，應重做。
鏡下計數(shù)時，若方格中細胞分布明顯不均勻，說明細胞懸液混合不均勻，需重新將細胞懸液進行混合，再重新計數(shù)。
計數(shù)時，對于位于邊線或交界處的細胞/細胞團，遵循“計上不計下，計左不計右”的規(guī)則。
一個細胞團計做一個細胞。
計數(shù)板計數(shù)時，最適濃度為5～10×105細胞/ml，此范圍外計數(shù)誤差偏大。高濃度細胞懸液，可取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計數(shù)。如果細胞數(shù)目很少則要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。
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