1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片經下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修復： 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復方法見附1）* 注：有些抗原勿需修復，
直接進入第5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），37℃濕盒中孵育30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應用DAB 溶液（試劑F）顯色；
15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；
16.封片： 待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
雙調蛋白（結腸直腸細胞源性生長因子）抗體
磷酸化水通道蛋白2抗體
粘附相關激酶抗體
磷酸化粘附相關激酶抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化水通道蛋白2抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化活化轉錄因子4抗體
磷酸化雄激素受體抗體
磷酸化雄激素受體抗體
磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
凋亡相關蛋白3抗體
自噬相關蛋白18抗體
自噬相關蛋白4A抗體
載脂蛋白A4抗體
12脂氧合酶抗體
血管緊張素III抗體
腺苷酸環(huán)化酶3抗體
血管動蛋白抗體
腺病毒早期E1A蛋白抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
磷酸化失調癥蛋白1抗體
錨蛋白重復結構域蛋白17抗體
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