高效液相色譜儀系統(tǒng)組成：液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。對于整個系統(tǒng)而言，柱子、泵和檢測器是核心部件同時也是易出問題的主要部位。
高效液相作為一種高精密儀器，如果在使用過程中不按照正確操作的話，就容易導(dǎo)致一些問題。其中常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰型異常問題。
一、柱效
柱效是色譜柱性能的評估標準，測試色譜柱效需*按照出廠測試報告的條件進行測試，考慮儀器、上樣量、柱外體積、采集頻率等因素的影響。
當(dāng)柱效降低時可能的原因及解決方法：
1、保護柱失效，需更換保護柱；
2、長期使用后，柱效低，屬正?，F(xiàn)象，日常使用后加強維護；
3、樣品前處理不足，需加強樣品前處理；
4、流動相過濾不好，需加強流動相過濾。
二、分離度
不同批次的色譜柱，新柱比舊柱分離度差，可能的原因及解決方法：
1、考慮方法是否適用，因此方法開發(fā)需采用新柱，方法驗證需采用三支同型號色譜柱；
2、新柱柱效或選擇性有差，需更換色譜柱。
柱子的分離度逐漸降低，可能的原因及解決方法：
1、色譜柱污染，需增加保護柱，或加強樣品或流動相前處理，或?qū)ιV柱進行沖洗及再生；
2、色譜柱塌陷或鍵合相流失，需更換色譜柱。
三、峰型
峰前沿，可能的原因及解決方法：
1、溶劑效應(yīng)，需使用流動相稀釋樣品；
2、過載，需減少進樣量或進樣體積；
3、共流出，需確認樣品的穩(wěn)定性，或調(diào)整流動相使共流出組分分離；
4、柱污染，需加保護柱，或加強樣品或流動相前處理或色譜柱沖洗及再生；
5、柱塌陷，需更換色譜柱；
6、柱外效應(yīng)，需重新連接色譜柱，或更換連接管路。
峰拖尾，可能的原因及解決方法：
1、溶劑效應(yīng)，需使用流動相稀釋樣品；
2、某些次級作用，調(diào)整流動相pH至少Pka±2；
3、過載，減少進樣量或進樣體積；
4、共流出，需確認樣品的穩(wěn)定性，或調(diào)整流動相使共流出組分分離；
5、柱污染，加保護柱，或加強樣品或流動相前處理，或色譜柱沖洗及再生；
6、柱塌陷，更換色譜柱；
7、柱外效應(yīng)，需重新連接色譜柱，或更換連接管路；
峰分叉，可能的原因及解決方法：
1、柱污染，加保護柱，或加強樣品或流動相前處理，或進行色譜柱沖洗及再生；
2、過載，減少進樣量或進樣體積；
3、柱塌陷，更換色譜柱；
4、柱篩板部分堵塞，加保護柱，或加強樣品或流動相前處理，或進行色譜柱沖洗及再生，或反向沖洗色譜柱。
峰展寬，可能的原因及解決方法：
1、某些次級作用，調(diào)整流動相pH至少Pka±2；
2、過載，減少進樣量或進樣體積；
3、柱污染，加保護柱，或加強樣品或流動相前處理或進行色譜柱沖洗及再生；
4、柱塌陷，更換色譜柱；
5、柱外效應(yīng)，重新連接色譜柱，更換連接管路。
四、雜峰
有雜峰出現(xiàn)，可能的原因及解決方法：
1、前一針的殘留，需改變測試方法，縮短分析時間；
2、流動相純度不夠，需保證流動相純度；
3、色譜柱污染，需清洗或更換色譜柱。這時也可能會導(dǎo)致保留時間的漂移，需要同時觀察色譜峰型、柱效、壓力的變化情況，推測色譜柱是否被污染。可以根據(jù)具體的測試條件來選擇適當(dāng)?shù)娜軇┻M行色譜柱的沖洗，或更換新的色譜柱。為了延長色譜柱的使用壽命，增加保護柱是非常有效的方法。
五、保留時間
保留時間忽前忽后，可能的原因及解決方法：
1、流速變化導(dǎo)致，檢查儀器問題。觀察柱前壓力，如果壓力不穩(wěn)定或者偏離正常值，可能是泵流速不準確或者有氣泡產(chǎn)生，出現(xiàn)保留時間的不穩(wěn)定，需要保證儀器流速的準確性與穩(wěn)定性；
2、柱溫變化，使用柱溫箱，保證恒溫；
3、流動相變化，重新配制流動相。流動相中某種試劑的揮發(fā)，流動相中不同試劑的比例配制有誤，也會導(dǎo)致保留時間的變化，需要確認流動相是否新鮮與正確；
保留時間提前或延后，可能的原因及解決方法：
1、色譜柱平衡不夠，需要考慮流動相是否已使色譜柱達到充分的平衡。一般情況下，流動相平衡色譜柱需要10-20個柱體積；但如果流動相中有使用弱酸、弱堿、緩沖鹽和離子對試劑，或者固定相為正相硅膠等，則需要更長的時間來平衡色譜柱；
2、色譜柱污染或受損，需更換色譜柱，或清洗再生色譜柱，或增加保護柱；
六、壓力
壓力高，可能的原因及解決方法：
1、系統(tǒng)壓力高，檢查儀器問題；
2、柱壓力高，需更換色譜柱，或清洗再生色譜柱，或增加保護柱；
壓力低，可能的原因及解決方法：
1、漏液，需檢查并重新擰緊漏液處；
2、流動相不對，需重新配制流動相；
3、色譜柱損壞，需更換色譜柱。
以上內(nèi)容只是對液相色譜中出現(xiàn)的常見的問題進行了分析，在故障排除時要遵守以下原則：
(1)一次只改變一個因素，確定假定因素與問題之間的聯(lián)系;
(2)如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費;
(3)養(yǎng)成良好的記錄習(xí)慣，這是成功進行故障排除的關(guān)鍵。
總之，在使用高效液相色譜時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)，則會大大延長儀器的使用壽命，并使儀器的性能得到大限度的發(fā)揮。
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