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2017-2-9 閱讀(18508)
要談0.1M PBS，我們可以先談一談0.01M PBS。因?yàn)?.01M PBS是比較清楚，沒什么爭(zhēng)論的。一般用于免疫組化的0.01M PBS配方為：NaH2PO4•2H2O 0.2964g，Na2HPO4•12H2O 2.9g，NaCl 8g。如果用于細(xì)胞培養(yǎng)，可以用這個(gè)配方：NaCl 8.00，Na2HPO.12H2O 2.90，KCl 0.2，KH2PO4 0.24。大家可以看出，同樣是0.01M PBS，但他們兩的配方并不*一樣，不過(guò)，這個(gè)是可以理解的，做細(xì)胞培養(yǎng)，當(dāng)然是要很好的保證細(xì)胞的活性，盡可能的保證所處的環(huán)境。而后一個(gè)配方加入了K，就是為了維護(hù)Na/K平衡。而前一個(gè)配方，只是做免疫組化，細(xì)胞已經(jīng)固定過(guò)的，也就不談什么活性不活性了，只要細(xì)胞不變形就OK了。因而維護(hù)Na/K平衡就沒有必要了。因而一切從簡(jiǎn)。當(dāng)然了，用后一個(gè)配方做免疫組化行不行呢？當(dāng)然是一點(diǎn)問題都沒有。而如果用前一個(gè)配方高壓后用于細(xì)胞清洗，行與不行，本人沒有測(cè)試過(guò)，但為了保險(xiǎn)起見，還是算了。
我們看一看這兩個(gè)配方，NaCl占主要成分，維持滲透壓，而HPO4/ H2PO4當(dāng)然是維持PH值了。這個(gè)0.01M是什么意思？NaCl濃度為8/58.5=0.13675M，HPO4濃度為2.9/358.14= 0.0081M，H2PO4濃度為0.2964/156.01= 0.0019M。大家一看這個(gè)結(jié)果就知道，0.01M是指磷酸根濃度。
如此類推，那個(gè)0.1M的PBS的配方就應(yīng)該是NaH2PO4•2H2O 2.964g，Na2HPO4•12H2O 29g，NaCl 8g。用于細(xì)胞培養(yǎng)目前倒沒聽人說(shuō)要用0.1M的PBS，所以在此就不做討論。
這樣一推算，感覺0.1M PBS也很簡(jiǎn)單，但是，我百度或者谷歌0.1M PBS的配方，都沒有找到我所推論出的配方，找到的幾頁(yè)也都是關(guān)于0.1M PBS的應(yīng)用。這個(gè)怪了，也許是國(guó)家保密配方吧（開個(gè)玩笑）。這個(gè)0.1M PBS配方的錯(cuò)誤之處在于滲透壓。
我們簡(jiǎn)單的計(jì)算一下滲透壓。πV=nRT 或π=cRT （式中π為稀溶液的滲透壓，V為溶液的體積，c為溶液的濃度，R為氣體常數(shù)，n為溶質(zhì)的物質(zhì)的量，T為溫度）。這個(gè)東東算起來(lái)比較麻煩，簡(jiǎn)單點(diǎn)說(shuō)就是，滲透壓與總離子濃度（摩爾濃度）成正比。
看看生理鹽水，總濃度為2*9/58.5=0.307692308M
再看看0.01M PBS總離子濃度為0.13675*2+0.0081*3+0.0019*2=0.3016M
再看看0.1M PBS 總離子濃度為0.13675*2+0.081*3+0.019*2=0.2735+0.243+0.038 =0.5545M，這個(gè)與生理鹽水差老遠(yuǎn)了。因而用這個(gè)去做免疫組化或者去配多聚甲醛，就有點(diǎn)問題了。
濃度高了，當(dāng)然是減少一些NaCl了。0.307692308(標(biāo)準(zhǔn)生理鹽水)-(0.243+0.038)/ 2=0.026。0.026/2*58.5=0.78g。
修正后的0.1M PBS配方為NaH2PO4•2H2O 2.964g，Na2HPO4•12H2O 29g，NaCl 0.78g。
假如不加zui后一點(diǎn)NaCl，總離子濃度為：0.081*3+0.019*2=0.281M。這個(gè)濃度與理鹽水0.307692308M相關(guān)8.7%,而與0.01M PBS相差6.8%。因而我個(gè)人認(rèn)為，對(duì)于體外的死細(xì)胞而言，這個(gè)差別不是特別大。所以傳言的0.1M PBS的關(guān)相應(yīng)用應(yīng)該是筆誤。應(yīng)該是0.1M PB。
相關(guān)產(chǎn)品
PBS干粉，用于免疫組化等常規(guī)實(shí)驗(yàn)
PBS液體，用于細(xì)胞培養(yǎng)用。
