　　(1)在開啟熒光燈源后約5～10min激發(fā)光強度趨于穩(wěn)定，裝載樣品進行觀察；為防止在調焦和尋找物像過程中過度激發(fā)光照會造成樣品熒光淬滅，最好先通過縮小熒光照明器的孔徑光闌或加ND濾光片將激發(fā)光調節(jié)到適度強度，有規(guī)律地移動樣品臺，待確定鏡像后，在調節(jié)到最佳熒光狀態(tài)用于拍攝記錄。

　　(2)鏡像質量不佳的調整。排除樣品制備因素外，可進行的必要調節(jié)措施是：

　?、倥懦上窆饴分械恼诠饣蛳薰馄骷鏒IC附件、ND濾光片等。

　?、谥匦抡{節(jié)熒光照明器的收光器對焦和孔徑光闌大小。

　?、奂毿恼{節(jié)物鏡覆蓋差校正環(huán)。

　?、軓筒闊晒饧ぐl(fā)/發(fā)射組件是否與所標記的熒光色素對應。

　　(3)在不影響分辨率的前提下，于照相取景框和CCD靶面范圍之外，可盡量回縮熒光光路視場光闌和物鏡(100X物鏡)的數(shù)值孔徑光闌調節(jié)環(huán)，以避免雜散光的影響、提高景深，并可減小激發(fā)面積防止附加樣品淬滅。

　　(4)暫時不觀察時，應阻斷激發(fā)光路。

　　(5)油鏡觀察時，須用“無熒光油”，尤其是在U、V激發(fā)時，因常規(guī)鏡檢用的香柏油帶有青色熒光。

　　3)熒光顯微鏡的熒光照相和數(shù)字CCD相機圖像采集

　　(1)熒光照相

　?、俦M管肉眼觀察熒光鏡像亮度與普通明場相差無幾，而實際上曝光時間要增加數(shù)倍甚至幾十倍，應使用快速感光膠片，如ISO200(24DIN)、ISO400(27DIN)。

　?、诟鶕?jù)熒光物像在測光區(qū)的分布比例和鏡像的明暗程度設置曝光補償調節(jié)，原則上適當增補償，以獲得背景黑暗熒光圖像明亮、鮮艷的照片效果。

　?、廴绻麤]有照明標線取景器，可先選擇較明亮的熒光區(qū)域進行對焦調整。

　　④對點狀熒光物像或撲捉某點為主的拍攝，可選擇適當?shù)狞c測光模式。

　?、輰υ谕环枰瑯訔l件拍攝的分散點狀熒光物像，可試用點測光配合自動鎖定方式拍攝。

　?、奁毓膺^程應避免任何振動，有條件可配置防震臺。

　　(2)數(shù)字CCD相機圖像采集

　?、俟鈱W接口的中間倍率要與CCD的芯片尺寸合理匹配。

　　②采用合適的熒光拍攝模式，摸索減背景(Background Subtraction)處理條件，根據(jù)鏡像情況設置Binning、Gain、Gamma等參數(shù)。

　?、垡駽CD芯片靈敏度較高，如果熒光鏡像過于明亮，為獲取對比度較好的采集圖像，可適當縮小熒光照明器孔徑光闌或加ND濾光片，特別是在熒光輝光較強影響拍攝樣品細節(jié)的情況時。

　　實際工作中，為獲得較好的熒光圖像拍攝質量需要對上述調節(jié)機制的綜合運用，反復摸索、優(yōu)化條件。

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