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轉(zhuǎn)化細(xì)胞凍存液的配制方法

時間:2018/5/15閱讀:1199
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     轉(zhuǎn)化細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是*的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時候,細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導(dǎo)致實驗失敗,如果沒有原始細(xì)胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。
1、常用凍存液組成成分
20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,各自含量占總體積的10%,然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?br />2、DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時對細(xì)胞無明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過細(xì)胞膜,降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細(xì)胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,可使冰點下降,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷。
3、轉(zhuǎn)化細(xì)胞注意事項     
  1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,可以過濾除菌。
  2.DMSO要用新的,而且要避光保存。
  3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。

Pyridostigmine Bromide 200mg 溴吡斯的明標(biāo)準(zhǔn)品 101-26-8 

200mg B-D-半乳糖苷酶標(biāo)準(zhǔn)品 9031/11/2

L-Cysteine Hydrochloride 200mg L-半胱氨酸鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 7048/4/6

Pentoxifylline 200mg 己酮可可堿標(biāo)準(zhǔn)品 6493/5/6

Proparacaine Hydrochloride 200mg 鹽酸丙美卡因標(biāo)準(zhǔn)品 5875/6/9

Beclomethasone Dipropionate 200mg 丙酸倍氯米松標(biāo)準(zhǔn)品 5534/9/8

Mexiletine Hydrochloride 200mg 鹽酸美西律標(biāo)準(zhǔn)品 5370/1/4

Diltiazem Hydrochloride 200mg 鹽酸地爾硫卓標(biāo)準(zhǔn)品 1205003

Fluorometholone Acetate 200mg 氟米龍醋酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 3801/6/7
轉(zhuǎn)化細(xì)胞

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