產(chǎn)品詳細(xì)介紹：

下列是產(chǎn)品的訂購信息!

產(chǎn)品僅用于科研。

DNA提取流程圖：

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱，離心管中加入ME(巰基乙)，(10mL加80ul，50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了)，在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末，裝入50mL離心管，按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液，顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10min，期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)，異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清，等體積的，異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液，4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm，4℃離心20min

(8)棄上清，用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚異戊(25:24:1)抽提兩次，異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙，在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm，4℃離心20min

(12)棄上清，沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量

操作步驟：

1. 勻漿處理：

a.組織將組織在液氮中磨碎，每50-100mg組織加入1ml TRIzol，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。

2.將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物分離。

3.可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

5. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

6. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。

7. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。