培養(yǎng)細胞增殖過程注意事項
體內(nèi)細胞生長在動態(tài)平衡環(huán)境中，而組織培養(yǎng)細胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、皿或其它容器，生存空間和營養(yǎng)是有限的。當細胞增殖達到一定密度后，則需要分離出一部分細胞和更新營養(yǎng)液，否則將影響細胞的繼續(xù)生存，這一過程叫傳代。每次傳代以后，細胞的生長和增殖過程都會受一定的影響。另外，很多細胞特別是正常細胞，在體外的生存也不是無限的，存在著一個發(fā)展過程。所有這一切，使組織細胞在培養(yǎng)中有著一系列與體內(nèi)不同的生存特點。

根據(jù)培養(yǎng)過程中是否需要分割培養(yǎng)物進行再培養(yǎng)而將細胞培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。  

一、原代培養(yǎng)  （一）過程  原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種及培養(yǎng)等步驟。原代培養(yǎng)的方法很多，基本和zui常用的是組織塊培養(yǎng)法和分離細胞法。 1、組織塊培養(yǎng)法 (1)基本操作過程  1）、用培養(yǎng)液濕潤所取組織材料，并用鋒利的眼科剪將附在其上的脂肪和結(jié)締組織去除干凈。再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用鋒利的眼科彎剪將組織塊剪成小塊；再用PBS或Hanks液漂洗多次，直至液體不渾濁、無油滴、清亮為止。  2）、用濕潤的吸管吸取切碎的組織塊，清清吹到培養(yǎng)瓶皿中，并將其按一定間距均勻放在培養(yǎng)瓶底壁上，量不要過多，要將組織塊切面貼在培養(yǎng)瓶底壁上；  3）、將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，使瓶底朝上，在種植了組織塊一側(cè)的對側(cè)面加足培養(yǎng)液，勿使組織塊與培養(yǎng)液接觸，塞緊瓶塞；  4）、將種植了組織塊的一側(cè)朝上，靜置于37℃培養(yǎng)箱中；待組織塊貼壁1h到3h后翻瓶，使貼壁的組織塊浸沒與培養(yǎng)液中，靜置；  5）、每隔2到3天更換一次培養(yǎng)液，或者根據(jù)培養(yǎng)瓶種顏色的變化確定換液時間。 2、注意事項  1）、組織塊接種后的前3天，從組織塊向外遷徙的細胞數(shù)很少，組織塊的黏附不牢固，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。  2）、加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。  3）、用組織塊培養(yǎng)時，要及時觀察，當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，因為已漂浮的組織塊和那些細胞碎片已經(jīng)死亡，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長，要及時清除。