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在我們實(shí)驗(yàn)中，養(yǎng)細(xì)胞是所有實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)過程中，總會(huì)遇到這樣那樣的麻煩，以下幾種情況，你是否遇到，如何解決，大師兄給你指明一二三。

如何判斷細(xì)胞污染了？

狀態(tài) 1： 細(xì)胞培養(yǎng)液變渾濁了，經(jīng)常見到是米湯樣，黃色液體，一般認(rèn)為細(xì)菌污染。

 

狀態(tài) 2：細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)含有能動(dòng)的小黑點(diǎn)，一般認(rèn)為是黑膠蟲。

 

狀態(tài) 3：胞培養(yǎng)基清亮，但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質(zhì)，有可能就是真菌感染。

 

策略：細(xì)胞污染了就直接扔了，還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈，并用紫外照射半小時(shí)，防止再次污染。同時(shí)建議細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素 (尤其是初學(xué)者)

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞周圍包括細(xì)胞上有很多小黑點(diǎn)，怎么辦?

 

策略 1：用胰酶消化下來后，低速短時(shí)間離心，不同實(shí)驗(yàn)室不一樣，如果平時(shí)是 1 000 轉(zhuǎn) 5 min 的話，就可以改為 700 轉(zhuǎn) 3 min，用新的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞收集是少一點(diǎn)，但是一般都能干凈很多。多傳幾代就好多了。

策略 2：如果多次嘗試之后還是不干凈，就懷疑是否存在支原體污染了，用抗支原體藥就 OK 了。一般用上 3～5 天，細(xì)胞就干干凈凈了。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞表面沾了很多死細(xì)胞，傳代過程中一直存在怎么破？

 

有一招屢試不爽，那就是用 PBS 洗兩遍之后，加胰酶進(jìn)去，晃一晃，迅速將胰酶倒出，再用 PBS 洗一下，再加胰酶正常消化。死細(xì)胞由于粘附能力很弱，第一次加胰酶進(jìn)去以后會(huì)掉下來，第二次加胰酶下來的細(xì)胞才是活性比較強(qiáng)的細(xì)胞。整完一次之后，再次傳代方法同上，一般 2～3 次之后，細(xì)胞就完好如初了。

細(xì)胞胞質(zhì)疏松，狀態(tài)不好，養(yǎng)不起來，怎么辦?

 

策略 1：一般情況下，從血清下手就行，要么換好血清，要么提高血清濃度，血清濃度提高到 15%～20% 培養(yǎng) 48 h，換成正常 10% 的濃度，用高濃度的血清培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞有毒性。

策略 2：血清下手之后可以同時(shí)采取提高細(xì)胞密度的方法，從培養(yǎng)瓶換到六孔板，12 孔板等，細(xì)胞密度大，細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子多，腫瘤細(xì)胞通過旁分泌途徑促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

預(yù)防策略：細(xì)胞胞質(zhì)疏松，老化的原因在于細(xì)胞傳代次數(shù)比較多，胰酶消化時(shí)間太長(zhǎng)，這時(shí)候，一定要控制細(xì)胞傳代次數(shù)，注意胰酶消化時(shí)間，胰酶消化時(shí)間過長(zhǎng)，容易導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松。有一招，元元沒試過，可以嘗試，將細(xì)胞凍起來，過段時(shí)間復(fù)蘇，細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)得比較好。

長(zhǎng)途運(yùn)輸過來裝滿培養(yǎng)液的細(xì)胞如何處理?

很多人都會(huì)遇到從其他地方買來細(xì)胞或者快遞運(yùn)來細(xì)胞，裝滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶的細(xì)胞怎么處理的問題。

第 1 步：先放 37℃ 培養(yǎng)箱放置 4 小時(shí)，這樣細(xì)胞在通過長(zhǎng)途跋涉以后得以穩(wěn)定，觀察細(xì)胞狀態(tài)。

第 2 步：將新鮮培養(yǎng)基和舊的培養(yǎng)基 1:1 稀釋，如果細(xì)胞狀態(tài)不好，可以將血清濃度提到 15%，否則正常培養(yǎng)，這樣有一個(gè)過渡期，不至于細(xì)胞換血清之后狀態(tài)不佳，15% 的血清培養(yǎng) 48 h 之后換成正常濃度培養(yǎng)。