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細(xì)胞培養(yǎng)中的污染監(jiān)控與檢測(cè)——細(xì)菌

閱讀:888      發(fā)布時(shí)間:2022-3-3
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細(xì)胞培養(yǎng)是生物醫(yī)學(xué)研究的常見操作,其中避免細(xì)菌污染是重要一環(huán)。細(xì)胞是否干凈,直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性的好壞。

一般情況下細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的常見污染主要有:細(xì)菌污染、真菌污染和支原體污染。每種情況又分別有不同的癥狀和解決方法。

我們將分三篇文章,簡(jiǎn)要概述三種不同污染的癥狀及處理方法。

一、細(xì)菌污染

細(xì)菌概述

細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物,一般為微米級(jí)別。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見的污染菌為大腸桿菌、葡萄球菌、假單胞菌等。

細(xì)菌污染癥狀

與其他污染相比,細(xì)菌污染在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中“發(fā)病"更為迅速,較容易被發(fā)現(xiàn)。具體表現(xiàn)為:

  • 細(xì)胞培養(yǎng)基短期內(nèi)變黃且渾濁(大量酸性物質(zhì)累積)

  • 靜置的培養(yǎng)液時(shí)不渾濁,但稍加震蕩,就有許多渾濁物漂起

  • 可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮

  • 細(xì)胞停止生長(zhǎng)并有中毒表現(xiàn),后出現(xiàn)大量死亡

細(xì)菌污染鑒定

簡(jiǎn)易方法:

1、取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查,憑經(jīng)驗(yàn)判斷細(xì)菌種類。

2、向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)滴入少量培養(yǎng)液,37 ℃培養(yǎng)以檢測(cè)。

專業(yè)試劑盒檢測(cè):

Minerva Biolabs公司的細(xì)菌PCR檢測(cè)試劑盒為例(點(diǎn)擊下方圖片直達(dá)微信商城,了解更多詳情):


該試劑盒采用PCR方法,用于檢測(cè)生物樣品(包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液)中是否存在細(xì)菌。根據(jù)序列分析,該試劑盒可檢測(cè)超過(guò)45種細(xì)菌屬,其中含污染細(xì)胞的常見菌屬:


試劑盒包括

凍干混合物:含引物/核苷酸/內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照DNA /聚合酶

復(fù)溶緩沖液

凍干的陽(yáng)性對(duì)照DNA

PCR級(jí)水


樣本處理

樣本不用提DNA,只需熱滅活(95 °C 5分鐘)。樣本需不含抗生素。如含抗生素,則細(xì)胞應(yīng)在不含抗生素的培養(yǎng)基中再培養(yǎng)至少一代。


保質(zhì)期

2-8℃可保存至少6個(gè)月。

凍干試劑溶解后,需在-18℃以下保存。


結(jié)果分析:


內(nèi)控對(duì)照顯示PCR反應(yīng)正常,樣本中無(wú)PCR抑制成分。460bp左右存在目的條帶,提示存在細(xì)菌污染。


細(xì)菌污染的祛除

對(duì)于一般細(xì)胞:發(fā)生污染直接丟棄,并對(duì)環(huán)境進(jìn)行消殺,紫外線滅菌、消毒液擦拭培養(yǎng)箱、工作臺(tái)等。

對(duì)于重要且污染相對(duì)較輕的細(xì)胞:一般用抗生素的常用量的 5~10 倍作沖擊療法,用藥 24~48 小時(shí)后再換常規(guī)培養(yǎng)液,需要注意的是:


一旦發(fā)生污染后再使用抗生素常常難以*,有的抗生素只有抑菌作用而無(wú)殺菌效應(yīng)。


且有研究表明,大量使用抗生素,或?qū)?xì)胞基因組產(chǎn)生影響。


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