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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，由于實(shí)驗(yàn)環(huán)境、操作者鼻腔口腔、實(shí)驗(yàn)器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細(xì)胞發(fā)生支原體污染的頻率很高。據(jù)美國(guó)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，細(xì)胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。

同時(shí)，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過(guò)電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實(shí)驗(yàn)者肉眼發(fā)覺(jué)。而支原體污染是個(gè)循序的過(guò)程，普通抗生素對(duì)其無(wú)效。因此，被支原體污染的細(xì)胞會(huì)持續(xù)受到影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。

支原體污染不僅是細(xì)胞培養(yǎng)中需要克服的現(xiàn)象，而且是制藥、生物制品生產(chǎn)中需要加以避免的。支原體污染的影響是什么？

支原體常規(guī)PCR法其原理和熒光定量PCR是一樣的，根據(jù)支原體核糖體的特異保守序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)待檢樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出判斷。

它的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確度很高，特別是德國(guó)MB的試劑盒，不僅qPCR的靈敏度可以達(dá)到10CFU/ml以上，普通PCR的靈敏度也可以達(dá)到各國(guó)藥典的這個(gè)要求。

特異性強(qiáng)，*涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。與細(xì)菌和真核DNA無(wú)交叉反應(yīng)。

操作比qPCR多了個(gè)跑電泳的步驟。

時(shí)間短，2-3小時(shí)可以出結(jié)果。

唯yi的限制，因?yàn)闄z測(cè)的是支原體的DNA，所以無(wú)法區(qū)分活的支原體。但生物制品在生產(chǎn)過(guò)程中，本身不應(yīng)該產(chǎn)生支原體污染，污染過(guò)也不行，所以這個(gè)限制反而變成了優(yōu)點(diǎn)。