類器官模型因其能夠再現(xiàn)真實組織的復雜性而在生物研究和篩選中越來越受歡迎。為了模擬體內(nèi)的人體肺器官，我們在有助于 3D 結(jié)構(gòu)形成的條件下培養(yǎng)了原代人肺上皮細胞，重現(xiàn)了肺氣道形態(tài)和功能上的特征。在肺類器官培養(yǎng)中，上皮干細胞和祖細胞在添加了一系列生長因子的 ECM 中培養(yǎng)。類器官隨后生長成復雜的結(jié)構(gòu)，保留了多系上皮細胞簇。這些特性使類器官培養(yǎng)成為一種富有前景的手段，可以廣泛應用于基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化方法，如藥物篩選和疾病建模。
這里我們闡述了一種高內(nèi)涵成像方法，可以監(jiān)測和可視化肺類器官的生長和分化，3D 結(jié)構(gòu)的重建，類器官結(jié)構(gòu)的復雜分析，細胞形態(tài)和活力，以及不同細胞標記物的表達。3D 肺類器官植入在 Matrigel domes。發(fā)育中的類器官包括具有復雜形態(tài)的球形物體，包括腔和膀胱結(jié)構(gòu)。在 8 周的生長過程中，我們監(jiān)測到了大小和復雜性的增加。用透射光監(jiān)測類器官，然后用 20-30 層 Z 軸掃描透過基質(zhì)凝膠對染色的類器官成像，物鏡倍數(shù)為 10 – 40x。使 用 ImageXpress® Confocal HT.ai 智能化共聚焦高內(nèi)
 涵成像分析系統(tǒng)新配置的激光光源顯著的提高照明強度，從而顯著提高了亮度、檢測靈敏度和成像速度。