β-酮酰還原酶(KR)抑制劑(GSK2194069)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-phospho-SHC (Tyr239/240)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
VTG(vitellogenin) 青鳉魚卵黃蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1mg
細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子抗體

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

紅色鹽幾何形菌Lysinibacillus sphaericus魚孕激/孕

構(gòu)巢曲霉Lysinibacillus sphaericus鮭魚降鈣(SCT)

玫瑰單胞菌Bacillus thuringiensis鮭魚降鈣(SCT)

釀酒酵母Bacillus thuringiensis魚類甲狀腺(T4)

蘑菇屬Bacillus thuringiensis魚類甲狀腺(T4)

舌狀炭角菌Bacillus thuringiensis魚雌二

澳型核果褐腐病菌Bacillus thuringiensis魚雌二

根霉Bacillus thuringiensis魚促腎上腺皮質(zhì)激

蒼白色鏈霉菌Bacillus thuringiensis魚促腎上腺皮質(zhì)激

空腸彎曲桿菌Bacillus thuringiensis魚雌激

蘇云金芽胞桿菌柏氏變種Bacillus thuringiensis魚雌激

香菇*Bacillus thuringiensis魚促卵泡

棒束青霉Bacillus thuringiensis魚促卵泡

湖北擬酵母Bacillus thuringiensis魚促黃體激

秀珍菇Bacillus thuringiensis魚促黃體激

枯草芽孢桿菌Bacillus thuringiensis魚磷化腺苷活化蛋白激

磷化細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子p100抗體瓜硫桿狀菌

磷化1型神經(jīng)纖維瘤抗體瓜枝孢（黃瓜黑星病菌）痢疾志賀菌

磷化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體玉蜀黍赤霉（麥類赤霉病菌）紅城紅球菌

磷化谷受體2B抗體第九矛束霉擬威克酵母
β-酮酰還原酶(KR)抑制劑(GSK2194069)SPTLC2 英文名稱： 絲酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶2抗體 0.2ml

Phospho-EGFR(Tyr845) 英文名稱： 磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 0.1ml

轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–α抗體 Anti-TGF-α 0.1ml

Anti-TLR4/FITC 熒光素標(biāo)記Toll樣受體4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Lck (Tyr505) 磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪氨酸激酶抗體 規(guī)格 0.1ml

BCHE(butyrylcholinesterase)CT 丁酰膽堿脂酶抗原(C端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg